原代細胞與細胞系該如何選：原代細胞生長緩慢，一般認為，原代細胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長會出現(xiàn)停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細胞叫做細胞株。當細胞傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機”，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в凶兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。用專門的原代細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，較大限度提高原代細胞的生長。濟南原代細胞分離試劑盒平均價格

使用RFect系列小核酸轉(zhuǎn)染試劑做siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染測實驗注意事項：1.細胞接種：一般做轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種/鋪板（細胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml），使做轉(zhuǎn)染前細胞密度在30-50%；如果細胞是原代細胞，接種密度可以密一些，細胞計數(shù)在2*10^6cell/ml；懸浮細胞可以在轉(zhuǎn)染當天接種/鋪板（細胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml），待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后做轉(zhuǎn)染前細胞密度30-40%。2.為了能在使用時有較好的轉(zhuǎn)染效果，靠前次使用建議您用24孔板做，每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑即可。將較佳轉(zhuǎn)染條件（siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的用量、比例）放大到對應的孔板即可成都正規(guī)原代細胞分離試劑盒廠家從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)。

細胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓Ｔ毎浅Ｃ舾?，重新凍結(jié)可能導致細胞死亡或損傷。與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。正常的原代細胞培養(yǎng)，在無污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導致實驗數(shù)據(jù)有差異，所以cell systems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度，這樣得到的實驗數(shù)據(jù)更為準確

細胞培養(yǎng)注意事項及常見問題解答：無菌操作細胞培養(yǎng)較看重的就是無菌操作，無菌操作是細胞培養(yǎng)是否成功的關(guān)鍵點。1、使用前用75%的乙醇擦拭細胞間的桌面、超凈臺、孵箱和離心機等；紫外照射細胞間和超凈臺30分鐘以上才可以進入使用。2、進入細胞間必須穿上隔離服或者細胞間**的白大衣，戴上手套和口罩，換上拖鞋，嚴格意義上來說，帽子也是要帶的。除了隔離服，其他穿著物品較好一次性使用。3、凡是放入超凈臺中的不是一次性使用的物品事先都需要經(jīng)過高壓滅菌；不能進行高壓處理的物品也需要經(jīng)過75%的乙醇消毒。包括酒精燈、吸管、移液器、試管架、培養(yǎng)皿、廢液缸等。4、操作過程中盡量接近酒精燈；用鑷子拿取頭、離心管、吸管等物品時，避免碰到使用端；不要在開口器皿的上端進行操作。較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)。

原代細胞的培養(yǎng)與建系細胞的來源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織部位及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進行再次培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化，經(jīng)大量擴增后所形成的生物學特性穩(wěn)定的克隆化細胞群，稱之為細胞株或克隆細胞。此過程稱為細胞的純化或細胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細胞培養(yǎng)工作的基礎，只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學習和掌握其他方法,本章重點敘述常用的基本技術(shù)?？壳肮?jié)原代細胞的取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進行細胞培養(yǎng)的靠前步，若取材不當，將會直接影響細胞的體外培養(yǎng)。為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。開封原代細胞分離試劑盒廠家

以5ml為較低限度，否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。濟南原代細胞分離試劑盒平均價格

原代細胞的獲取：1.培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法，取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間，期間可換液或者傳代。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法，在培養(yǎng)期間需要隨時關(guān)注細胞的生長狀況，需觀察其是否貼壁，是否污染，組織塊法要觀察是否有細胞遷移出來。正常情況下48~72h可換液一次。3.細胞狀態(tài)判斷正常貼壁細胞在培養(yǎng)幾天后，會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底，有的呈纖維狀，有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細胞圖（左：小鼠成纖維細胞；右：雞胚成纖維細胞；下：人成纖維細胞）。濟南原代細胞分離試劑盒平均價格

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