鼠尾膠原實驗應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

以鼠尾膠原為支架的類似物的建立：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細胞生長狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ)；②成纖維細胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學特性，它是研究成纖維細胞與細胞外基質(zhì)之間以及細胞之間相互作用的良好模型。長沙正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體。

鼠尾膠原類似物的建立：目的：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細胞生長狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ)；②成纖維細胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學特性，它是研究成纖維細胞與細胞外基質(zhì)之間以及細胞之間相互作用的良好模型。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: 1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀； 2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中，調(diào)節(jié)PH = 6.5 ;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理；3.將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時，然后真空冷凍干燥，凍干產(chǎn)品經(jīng)進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌、包裝，得到成品膠原蛋白粉末。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水、無菌1M NaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1M NaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積，混勻，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

要準備的器具：組織剪2把，有齒鑷1把，無齒鑷1把，200 ml燒杯1個，培養(yǎng)皿1個，帶蓋廣口瓶1個，離心管、小瓶數(shù)個，滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1％醋酸溶液。經(jīng)44.48N10 min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液。取大鼠尾巴，洗凈，置75%酒精浸泡消毒后，手持尾巴，用止血鉗夾住尾巴較高，折斷尾骨后拉出尾腱，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中，稱尾腱的重量，按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液，搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置48 小時，離心。吸取其上清，分裝至小瓶，4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。石家莊鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

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