鼠尾膠原實驗應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式，為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞，培養(yǎng)7天時進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻，平均厚度約為1mm；HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開；掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接；同一細(xì)胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立，為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備，純度達(dá)到95%以上。杭州正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

服用膠原蛋白的注意事項：1、大分子膠原蛋白進(jìn)入人體后需要降解為小分子肽、氨基酸才能被人體吸收，真正有效吸收的成分并不多。2、這些食物多半脂肪含量較高，不適合經(jīng)常食用。高熱量、高脂肪，尤其是油炸食物都容易產(chǎn)生自由基，加速老化。如果能少吃這一類食物，就等于減少了身體被自由基傷害的機(jī)會及皮膚出現(xiàn)黑斑、皺紋等的風(fēng)險。3、孕婦是不能服用膠原蛋白產(chǎn)品，因膠原蛋白是19種氨基酸組成的，其中有幾種是不能被胎兒吸收的，容易引起第二特征過早的發(fā)育和成熟，不利于出生后的嬰兒成長和發(fā)育。武漢鼠尾膠原使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用； (2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌，防止凍結(jié)成塊，得到膠原溶脹液； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1，在4°C，48?74小時酶解，期間間歇性攪拌。

膠原蛋白的提取方法：酸法提?。核岱ㄌ崛≈饕捎玫碗x子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備，但產(chǎn)品得率低，設(shè)備腐蝕嚴(yán)重，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液。鼠尾膠原，是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: 1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀； 2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中，調(diào)節(jié)PH = 6.5 ;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進(jìn)行脫鹽處理；3.將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時，然后真空冷凍干燥，凍干產(chǎn)品經(jīng)進(jìn)一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌、包裝，得到成品膠原蛋白粉末。制備鼠尾膠原：搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話

堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。杭州正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。杭州正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

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