鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用:在國外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到 的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的 材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長因子(EGF Sigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰 蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞 懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下 皮膚后.以 消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液. 用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平 皿.(3)鼠尾膠原 凝膠體的制備:具體方法參見文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴 入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中 30rain,散盡剩余氨氣。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原,是一種細(xì)胞支持物,它是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成份。珠海正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商
要準(zhǔn)備的器具:組織剪2把,有齒鑷1把,無齒鑷1把,200 ml燒杯1個(gè),培養(yǎng)皿1個(gè),帶蓋廣口瓶1個(gè),離心管、小瓶數(shù)個(gè),滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌。需配制的液體0.1%醋酸溶液。經(jīng)44.48N10 min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75%酒精溶液。取大鼠尾巴,洗凈,置75%酒精浸泡消毒后,手持尾巴,用止血鉗夾住尾巴較高,折斷尾骨后拉出尾腱,將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中,稱尾腱的重量,按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液,搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置48 小時(shí),離心。吸取其上清,分裝至小瓶,4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。重慶鼠尾膠原酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。
利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。 方法 通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白,并重構(gòu)成膠原纖維。然后,將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2~6 d,通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。 結(jié)果 酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維,并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示:礦化2 d后,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維,膠原纖維部分礦化;礦化6 d后,膠原纖維內(nèi)部完全礦化,形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。 結(jié)論 利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維,經(jīng)礦化可形成與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料。
鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用,同時(shí)它也是一種天然的黏附劑,當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,制備細(xì)胞爬 片時(shí),可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。通 過本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾膠原將其固定于 培養(yǎng)瓶內(nèi)。 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料: 大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理 鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容: 1、制備鼠尾膠原。 2、切割小玻片。 3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,成本低廉。膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成。
膠原蛋白的功效與作用:1、可以作為一種補(bǔ)鈣食品。膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運(yùn)輸鈣到骨細(xì)胞的運(yùn)載工具,骨細(xì)胞中的骨膠原是羥基磷灰石的黏合劑,它與羥摹磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此,只要攝入足夠的膠原蛋白,就能保證正常機(jī)體鈣質(zhì)的攝入量,膠原蛋白可成制成補(bǔ)鈣的保健食品。2、可以為特殊人群使用。婦科疾病的根源來自于內(nèi)分泌失調(diào),膠原蛋白能夠改善婦科疾病的困擾,而更年期的婦女更需要膠原蛋白供給身體所需,使得更年期婦女能夠更輕松面對各種不適。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。蕪湖鼠尾膠原銷售廠家
鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)長時(shí)程的記錄。珠海正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商
鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察:果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時(shí)呈微白色;礦化2 d后,膠體的顏色逐漸加深至乳白色;礦化6 d后,隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內(nèi)部,膠體顏色加深至純白色,并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體,予鑷子夾起,其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落。TEM表征顯示:礦化2 d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部,膠原纖維部分礦化,沿著膠原纖維生長,忖度變深;礦化6 d后,Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失,膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,嵌入膠原纖維縱向生長。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時(shí),由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),膠原纖維呈現(xiàn)黑色,選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。珠海正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商