PAS染色試劑配制及染色方法:1.材料與方1.1 實(shí)驗材料新鮮小白鼠肝臟、腎臟標(biāo)本各30例,均來自我室實(shí)驗材料。1.2 主要試劑1.2.1 AAF固定液又稱酒精醋酸福爾馬林混合固定液,其配方:無水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2 Carnoy固定液 氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3 過碘酸溶液 0.5g過碘酸(HIO)溶于100mL蒸餾水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:過碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸鈉0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4 無色品紅液(Schiff氏液) 在三角燒內(nèi)加入蒸餾水500mL,煮沸后,在保持微沸的情況下,加入堿性品紅2.5g,并不斷搖動約5min(勿使之沸騰),使堿性品紅徹底溶解(溶解液為深紅色)。冷卻到50℃時,過濾,加入1N鹽酸50mL,再待冷卻至25℃時加入偏重亞硫酸鈉2.5g,塞住瓶口,搖動容器以充分混合(此時顏色明顯變淡),然后避光放置或冰箱內(nèi)24h如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病。江西提供糖原染色試劑盒報價
糖原及粘液染色法注意事項:1、糖原的固定要及時,而且標(biāo)本要新鮮。2、如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,因無水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細(xì)胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學(xué)純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏試劑,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,首先應(yīng)考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時可考慮適當(dāng)?shù)脑黾佑昧?。其次考慮堿性品紅本身,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,但不同批號,其效果就可能不同,應(yīng)特別引起注意~上海品牌糖原染色試劑盒平均價格本試劑盒適用于骨髓細(xì)胞涂片,血液細(xì)胞涂片。
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液
糖原染色:方法固定液Carnoy固定液:純酒精60ml冰醋酸10ml氯仿30ml,也可以選用75%酒精配制1)過碘酸酒清夜配法:過碘酸(HIO.2HO)0.4g95%酒精35mlM/5醋酸鈉(2.72g+蒸餾水100ml)5ml蒸餾水10ml保存于冰箱內(nèi),用棕色瓶,可用兩周.2)Schiff氏液:0.5克堿性品紅加入100毫升蒸餾水中,時時搖動三角瓶5分鐘,使之充分溶解.冷卻至50℃后過濾加入10毫升1N鹽酸.冷卻至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸鈉,在室溫中至少靜置24小時,然后密封冰箱保存.3)Schiff氏酒**配置Schiff氏液11.5ml1NHCI0.5ml純酒精23ml4)亞硫酸水1%偏重亞硫酸蒸餾水180ml的樹膠溶解~取材必須新鮮,這一點(diǎn)對于從事細(xì)胞生物學(xué)研究尤為重要。
PAS技術(shù)是很少可檢測不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液。所以網(wǎng)狀纖維的組織化學(xué)染色,在臨床病理診斷上占著相當(dāng)重要的位置。擁有日本進(jìn)口的各種染料,保證切片染色效果。北京正規(guī)糖原染色試劑盒單價
植物材料在選擇時須盡可能不損傷植物體或所需要的部分。江西提供糖原染色試劑盒報價
糖原染色的原理與操作方法是什么:(1)原理:過碘酸將血細(xì)胞內(nèi)的糖原氧化,生成醛基。醛基與雪夫液中的無色品紅結(jié)合,形成紫色化合物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。(2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分鐘,流水沖洗,晾干。滴加過碘酸溶液作用20分鐘,流水沖洗,晾干。滴加雪夫液作用60分鐘,流水沖洗,晾干。滴加甲基綠溶液復(fù)染10分鐘,流水沖洗,晾干鏡檢。細(xì)胞的組織化學(xué)方法,是研究細(xì)胞成分常用的方法之一。它是利用化學(xué)試劑與細(xì)胞內(nèi)的某些物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng),從而在細(xì)胞局部形成有色沉淀物,再通過顯微鏡對組織內(nèi)的生物化學(xué)成分進(jìn)行定性、定位、定量研究江西提供糖原染色試劑盒報價