鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過(guò)夜。在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過(guò)夜。5．從包被表面除去多余的液體。過(guò)夜干燥。如果膠原溶液不是無(wú)菌的，這時(shí)候可以在無(wú)菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過(guò)夜消毒。 在接種細(xì)胞前用無(wú)菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。溫州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無(wú)菌10×PBS、無(wú)菌蒸餾水、無(wú)菌1M NaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無(wú)菌管以收存膠原蛋白I。4）在無(wú)菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無(wú)菌冰冷1M NaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無(wú)菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積，混勻，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí)。6）使用時(shí)，無(wú)菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。武漢正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦4°C沉淀10小時(shí)，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。

利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類(lèi)自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。 方法 通過(guò)醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白，并重構(gòu)成膠原纖維。然后，將重構(gòu)后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2～6 d，通過(guò)透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。 結(jié)果 酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構(gòu)成膠原纖維，并且具有特征性的D-Band結(jié)構(gòu)。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示：礦化2 d后，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維，膠原纖維部分礦化；礦化6 d后，膠原纖維內(nèi)部完全礦化，形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。 結(jié)論 利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構(gòu)成膠原纖維，經(jīng)礦化可形成與人類(lèi)自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)一致的仿生骨材料。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等 步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞 培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境， 使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。 1，在使用鼠膠原蛋白 型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12 細(xì)胞的 貼壁和生長(zhǎng)。 1mg/ml濃度以上，pH 左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，檢查到 NIH-3T3 細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng)、PC-12 細(xì)胞在三維膠表面 正常生長(zhǎng)。 使用方法： 1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度： 1-5ug/cm 0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理，收集上清液；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時(shí)，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時(shí)，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡。石家莊鼠尾膠原報(bào)價(jià)

鼠尾膠原、多聚賴(lài)氨酸和明膠作為基質(zhì)包被培養(yǎng)器皿。溫州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾膠原使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例，用無(wú)菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿(mǎn)器皿的表面。開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干，也可以在室溫放置1小時(shí)后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。三維膠原凝膠的制備：A、無(wú)細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。溫州鼠尾膠原生產(chǎn)廠家