培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多,根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等;根據(jù)使用范圍可分為細菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置,現(xiàn)配現(xiàn)用。大多數(shù)細菌都能在富含有機物的基質(zhì)中繁殖生長,因此有機培養(yǎng)基是基本的培養(yǎng)基之一。厭氧培養(yǎng)液
合成培養(yǎng)基(synthetic medium) 由已知化學(xué)成分的營養(yǎng)物質(zhì)組成的培養(yǎng)基。根據(jù)微生物對營養(yǎng)要求的不同,可完全由無機鹽或化合物組成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等,其組成成分已知,只要嚴(yán)格操作,各批次間質(zhì)量可做到穩(wěn)定一致。此培養(yǎng)基可用來檢測某種營養(yǎng)物或藥物對微生物代謝的影響。組織細胞培養(yǎng)液均屬合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的成本較高,其價格相當(dāng)于同類天然培養(yǎng)基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無機鹽的合成培養(yǎng)基,只適用于自養(yǎng)菌的培養(yǎng),如培養(yǎng)亞硝化細菌、氧化硫桿菌等的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基大部分成分為已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的營養(yǎng)物質(zhì),其中的個別或少數(shù)成分為未明化學(xué)成分的必須營養(yǎng)物,成為半合成培養(yǎng)基,如百日咳菌苗生產(chǎn)用的水解酪素培養(yǎng)基。棉子糖-組氨酸培養(yǎng)基培養(yǎng)基應(yīng)適合不同類型細菌的生長,包括需氧菌和厭氧菌。
細菌培養(yǎng)基之面粉瓊脂培養(yǎng)基:面粉60g,瓊脂20g,水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調(diào)勻,補充水分,調(diào)整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。微藻培養(yǎng)基,BG-11培養(yǎng)基:NaNO3 1.5g,K2HPO4 ·3H2O0.04g,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (檸檬酸)0.006g,F(xiàn)erric ammonium citrate(檸檬酸鐵銨0.006g,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸餾水)919ml。
細菌培養(yǎng)基之根瘤菌培養(yǎng)基:葡萄糖10g,磷酸氫二鉀0.5g,碳酸鈣3g,硫酸鎂0.2g,酵母粉0.4瓊脂20g,水1000ml,1%結(jié)晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用。放線菌培養(yǎng)基:(1)淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基(高氏一號培養(yǎng)基)可溶性淀粉2.0g,硝酸鉀0.1g,磷酸氫二鉀0.05g,氯化鈉0.05g,硫酸鎂0.05g,硫酸亞鐵0.001g,瓊脂2g,水100ml。先把淀粉放在燒杯里,用5ml水調(diào)成糊狀后,倒入95ml水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補足失水。調(diào)整pH值到7.2-7.4,分裝后滅菌,備用。培養(yǎng)基是細胞和微生物生長所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。
要獲得微生物純培養(yǎng),必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言,更是要進行嚴(yán)格的滅菌。對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時間高溫會使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分鐘進行滅菌,某些對糖類要求較高的培養(yǎng)基,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。為了避免細胞爆破釋放DNA和蛋白質(zhì),培養(yǎng)基中常常添加DNA酶和蛋白酶等酶類。生物素測定培養(yǎng)基
Luria-Bertani 培養(yǎng)基是一種常用的細菌培養(yǎng)基,可用于大腸桿菌 E. coli 的培養(yǎng)。厭氧培養(yǎng)液
胰島素(Insulin)作用普遍,包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進細胞生長等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對細胞的作用,進而引起組織乃至機體的整體反應(yīng)。一般可將胰島素在細胞水平的作用分為三大類:代謝作用、促生長作用、以及代謝和促生長混合作用。胰島素對細胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過其與細胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導(dǎo),而胰島素對細胞的促生長作用則是通過其與細胞膜上胰島素的樣生長的因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導(dǎo)的。在無血清細胞培養(yǎng)液中,常添加胰島素來維持細胞生長,調(diào)節(jié)細胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。厭氧培養(yǎng)液
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