分離原理:層析柱利用混合物中各組分理化性質(zhì)的差異,如吸附力、分子形狀、大小、分子極性等,在兩相系統(tǒng)中進(jìn)行分離。"利用混和物中各組分理化性質(zhì)(吸附力、分子形狀、大小、分子極性、分子親和力以及分配系數(shù))的差異,在物質(zhì)經(jīng)過兩相中進(jìn)行分離的一種技術(shù)。"類型多樣:層析柱按物理狀態(tài)可分為氣相層析和液相層析,按層析方式可分為柱層析、薄層層析和紙層析。按兩相所處物理狀態(tài)分類氣相層析:氣液層析(固定相為液體)和氣固層析(固定相為固體),流動相為氣體。液相層析:液液層析(固定相為液體)和液固層析(固定相為固體),流動相為液體。"固定相和流動相:層析柱中的固定相可以是固體或液體,而流動相則是推動混合物通過固定相的介質(zhì),可以是氣體或液體。大孔層析柱:用于分離大分子化合物,如蛋白質(zhì)、核酸等。蕪湖實驗室不銹鋼層析柱廠家電話
它通常由柱體、固定相和流動相組成。柱體一般為玻璃或不銹鋼材質(zhì),有一定的長度和直徑。固定相填充在柱體內(nèi),是一種具有特定吸附或分配性質(zhì)的物質(zhì),如硅膠、氧化鋁、離子交換樹脂等。流動相則是攜帶混合物通過固定相的液體或氣體。當(dāng)混合物隨著流動相通過層析柱時,由于不同成分在固定相和流動相之間的分配系數(shù)不同,它們在柱內(nèi)的移動速度也會不同,從而實現(xiàn)分離。例如,在液相色譜中,流動相通常是有機溶劑或緩沖溶液,混合物中的不同成分會根據(jù)其極性、分子量等性質(zhì)在固定相上有不同的保留時間,依次流出層析柱,達(dá)到分離的目的。層析柱廣泛應(yīng)用于化學(xué)、生物、醫(yī)藥等領(lǐng)域,用于分離和純化各種化合物,如蛋白質(zhì)、核酸、藥物等。它具有分離效率高、操作相對簡單等優(yōu)點。四川中小試玻璃層析柱廠家電話層析柱在手,分離難題不再有。
柱層析操作時,先在圓柱管中先填充不溶性基質(zhì),形成一個固定相。將樣品加到柱子上,用特殊溶劑洗脫,溶劑組成流動相。在樣品從柱子上洗脫下來的過程中,根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復(fù)分配將組分分離。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應(yīng)將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。柱層析的上樣也有干法和濕法之分:干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后,在加入少量硅膠,拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩,但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑(比較好就是展開劑,如果展開劑的溶解度不好,則可以用一極性較大的溶劑,但必須少量)將樣品溶解后,再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液,沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后,再加入。
移動與分離:由于分配系數(shù)的差異,各組分在層析柱中的移動速度不同。分配系數(shù)較大的組分(即與固定相相互作用較強的組分)移動速度較慢,而分配系數(shù)較小的組分(即與固定相相互作用較弱的組分)移動速度較快。因此,隨著流動相的連續(xù)洗脫,各組分在層析柱中逐漸分離。逐步洗脫:在實際操作中,為了進(jìn)一步提高分離效果,通常會采用逐步改變流動相組成和極性的方法。例如,從極性較小的溶劑開始洗脫,逐漸增加溶劑的極性,以便將極性不同的組分依次洗脫下來。這種方法能夠更精細(xì)地調(diào)控各組分在固定相和流動相之間的分配系數(shù),從而實現(xiàn)更好的分離效果。2、選擇合適的層析柱可以提高實驗的分離效果和純化效率。
近年來,柱層析方法進(jìn)行了許多方面的創(chuàng)新,尤其表現(xiàn)在自動化和過程控制領(lǐng)域中。用于流體傳送和數(shù)據(jù)采集的新式精確控制器以及先進(jìn)的處理系統(tǒng)都提高了柱層析的可靠性和重現(xiàn)性。自動化促進(jìn)柱層析科學(xué)發(fā)展的一個領(lǐng)域是裝填工序。將介質(zhì)裝填到層析柱中曾經(jīng)被認(rèn)為是一項需要熟練技巧、勞動強度大的生產(chǎn)活動,需要大量的操作培訓(xùn)才能保證一致性。但是,事實上,再純熟的人工操作也會導(dǎo)致不定因素出現(xiàn),并可能破壞批次生產(chǎn)的重復(fù)性。對藥品的研發(fā)而言,重復(fù)性是非常關(guān)鍵的,若層析柱裝填沒有達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),產(chǎn)品純度和產(chǎn)率就會受影響。嚴(yán)重的結(jié)果是,該批生產(chǎn)會遭到破壞,導(dǎo)致成本大幅超支和生產(chǎn)停工。臨床檢驗器械中的層析柱是一種常用的分離和純化工具。河北工業(yè)生產(chǎn)化PP聚丙烯層析柱供應(yīng)商
層析柱可以將目標(biāo)化合物從混合物中純化出來。蕪湖實驗室不銹鋼層析柱廠家電話
在許多應(yīng)用中,膜層析在速度和工藝經(jīng)濟(jì)性方面表現(xiàn)出的優(yōu)勢。這項技術(shù)是采用多孔膜,并在膜表面鍵合活性化學(xué)基團(tuán)。膜層析具有一種孔結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)可通過化學(xué)修飾鍵合帶電的親水聚合物。與常規(guī)的層析填料相比,開放的孔結(jié)構(gòu)能為生物分子結(jié)合提供更多可供使用的表面積。對流孔促使物質(zhì)傳遞快速而且有效,因為流體流動直接穿過膜孔,沒有擴散流限制。目前,膜層析已成功應(yīng)用于生產(chǎn)規(guī)模中DNA、蛋白質(zhì)和病毒的捕獲和去除。拋棄型裝填好的層析膜柱,其去除雜質(zhì)的速度是柱層析的100倍。在柱層析中可供結(jié)合的表面積大多位于填料孔結(jié)構(gòu)中,只有通過擴散力才能達(dá)到。大分子和病毒無法擴散到這些孔隙中,與填料外表面位點結(jié)合。與柱層析相比,無擴散流限制的膜層析在去除DNA、病毒、質(zhì)粒等方面高出10~100倍。膜層析同樣可以線性放大,這是生產(chǎn)廠家把產(chǎn)品從實驗室規(guī)模放大到生產(chǎn)規(guī)模需要考慮的關(guān)鍵因素。蕪湖實驗室不銹鋼層析柱廠家電話