含瓊脂的培養(yǎng)基有時在平板上不凝固或凝固不好問題:在此種情況下,建議對于需要高壓滅菌的培養(yǎng)基,倒入平板前先搖一搖。主要是瓊脂培養(yǎng)基的分子量比較大,在冷卻過程中容易沉淀到底,造成瓊脂不能均勻分布。對于無需高壓滅菌的培養(yǎng)基,不能直接煮沸溶解后倒入平板、需要重復(fù)三至五次煮沸溶解過程,因一次無法保證瓊脂完全溶解。微生物培養(yǎng)基成分中含有染料或指示劑;不同批次的粉狀培養(yǎng)基含水量不同。一般要求≤6。含水量越高,顏色越深;研磨時間越長,顏色越深等三個原因。微生物只有在營養(yǎng)物質(zhì)濃度及其比例合適時才能良好生長。進(jìn)口培養(yǎng)基制備儀
培養(yǎng)基的稱量和溶解:小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基(必要時佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作,以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入適量的水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊),然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱,并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散,必要時應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)浸泡幾分鐘。注意:培養(yǎng)基的加熱溶解或高溫滅菌盛放使用的容器不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時攪動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。進(jìn)口培養(yǎng)基制備儀有的培養(yǎng)基還含有素和色素,用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。
培養(yǎng)基的配制:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方稱取各種藥品,加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3、調(diào)PH:用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。4、過濾:濾紙或棉花進(jìn)行過濾。5、分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。(1)三角瓶:若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,較多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。(2)試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度。固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。6、包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進(jìn)入把棉塞弄濕。7、滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。
培養(yǎng)基的配置應(yīng)該注意的幾大步驟:常用玻璃儀器的準(zhǔn)備制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細(xì)吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈,晾干后備用。(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內(nèi),于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干,備用。(2)試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好,再用布或報紙包扎好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干,備用。(3)吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽內(nèi)的氣體污染),然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi),于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干,備用。其他玻璃器皿均應(yīng)按上法處理,也應(yīng)裝金屬筒內(nèi)160℃干熱滅菌2h后,備用。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。
培養(yǎng)基的購置:從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看,不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品,甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。對培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評價后選擇合格的供應(yīng)商,這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè);企業(yè)是否通過了質(zhì)量管理體系的認(rèn)證是較為客觀的評價指標(biāo)。要求生產(chǎn)企業(yè)提供:培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全/危害數(shù)據(jù)等材料。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低,應(yīng)在配制培養(yǎng)基時加以調(diào)節(jié)。山東瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備儀
培養(yǎng)基配好后不宜久置,很好現(xiàn)配現(xiàn)用。進(jìn)口培養(yǎng)基制備儀
微生物發(fā)酵培養(yǎng)基配制注意事項:①養(yǎng)分濃度和配比合適:微生物只有在培養(yǎng)基中養(yǎng)分濃度合適的情況下才能生長良好是合適的。當(dāng)養(yǎng)分濃度過低時,不能滿足微生物正常生長的需要。②微生物培養(yǎng)基pH條件控制:培養(yǎng)基的pH必須控制在一定范圍內(nèi),以滿足不同種類微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝物。各種微生物生長繁殖或代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的較佳pH條件不同。通常細(xì)菌和放線菌適合在7~7.5pH范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌一般在4.5~6pH范圍內(nèi)生長。③微生物培養(yǎng)基原料來源選擇:培養(yǎng)基配制時,應(yīng)盡可能使用低廉易得的原料作為培養(yǎng)基成分。尤其在發(fā)酵行業(yè),培養(yǎng)基用量大,使用成本較低原料實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品附加價值。例如在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)過程中,制糖業(yè)含蔗糖廢液、乳業(yè)含乳糖廢液、大豆廢液工業(yè)和黑色廢物、造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸鹽紙漿等經(jīng)常被作為培養(yǎng)基原料使用。④成品培養(yǎng)基滅菌處理、為了獲得微生物的純培養(yǎng)物,必須避免被細(xì)菌污染,所以對使用的設(shè)備和工作場所進(jìn)行消毒和消毒。對于微生物培養(yǎng)基要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理。進(jìn)口培養(yǎng)基制備儀
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