固體斜面培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基的過濾澄清,液體培養(yǎng)基必須一定澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi),裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個雞蛋的蛋白,強力振搖3~5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。培養(yǎng)基的分裝,培養(yǎng)基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。培養(yǎng)基根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。黑龍江Systec培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基質(zhì)量測試:(1)澄清度:水是細胞培養(yǎng)基的溶劑。細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分只有完全溶解于水才能被細胞吸收攝取,細胞才能生長增殖,因此細胞培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。該項目是通過對水溶解后的細胞培養(yǎng)基的澄清度檢查,判斷細胞培養(yǎng)基的澄清度。按中國藥典2005年版二部附錄ⅨB進行。(2)pH值:哺乳類動物細胞生長需要合適的酸堿度,pH過高或者過低都會導致細胞死亡。pH值的測定也可以檢查細胞培養(yǎng)基的批間差。清大天一標準規(guī)定取規(guī)定量供試品,用注射用水(水溫20℃-30℃)溶解至1L,加入規(guī)定量碳酸氫鈉到上述溶液中,用與細胞培養(yǎng)基溶液pH值相近的兩點標準緩沖液校準后的酸度計進行測定。按中國藥典2005年版二部附錄ⅥH進行;加入規(guī)定量的碳酸氫鈉到上述溶液中,按中國藥典2005年版二部附錄ⅥH進行。遼寧培養(yǎng)基制備器售后服務培養(yǎng)基制備器使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。
培養(yǎng)基的實驗室制備:①概述:培養(yǎng)基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。有些培養(yǎng)基無需高壓滅菌,可煮滅菌。如,含亮綠的腸道菌培養(yǎng)基對光和熱特別敏感,應在煮沸后快速冷卻,避光保存。同樣,一些試劑則不需要滅菌,直接使用(參見相關(guān)標準或生產(chǎn)廠商的使用說明)。②濕熱滅菌;p濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進行。高壓霉菌一般采用121℃±3℃霉菌15min。如果培養(yǎng)基的體積超過1000mL,要對滅菌條件進行適當?shù)恼{(diào)整。所有操作均要按照標準和使用說明的規(guī)定進行。注:大容量培養(yǎng)基(>1000mL)滅菌時可能會造成過度加熱。加熱后應采取適當?shù)姆绞嚼鋮s,防止沸溢。這對大容量培養(yǎng)基和敏感性培養(yǎng)基(如含亮綠的培養(yǎng)基)是非常重要的。
培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產(chǎn)前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。另外,應將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴格分開,并有各自獨自的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對無毒區(qū)應保持相對負壓,防止病毒對培養(yǎng)細胞(尤其是細胞庫)的污染。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:溫度探頭測量培養(yǎng)基實際溫度,控溫很準。
培養(yǎng)基的類別按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分:培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三類。(1)古體培養(yǎng)基。是在培養(yǎng)基中加入凝固劑,有瓊脂、明膠、硅膠等。古體培養(yǎng)基常月于微生物分離、鑒定、計數(shù)和菌種保存等方面。(2)液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基中不加任何凝固劑。這種培養(yǎng)基的成分均勻,微生物能充按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng),目標菌應呈現(xiàn)良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài),非目標菌應是微弱生長或無生長。調(diào)節(jié)氧化還原電位(Eh) 各種微生物對培養(yǎng)基的Eh要求不同。福建進口培養(yǎng)基制備器
全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:水蒸氣高溫滅菌,保證整個制備過程在無菌下進行。黑龍江Systec培養(yǎng)基制備器
干粉培養(yǎng)基有哪些注意事項:①熔化培養(yǎng)基制備必須在玻璃容器中進行,如果使用銅或鐵器皿,會影響細菌的生長。②注意按照先加水再加顆粒干粉培養(yǎng)基順序,反之則不利于培養(yǎng)基溶解。③單在必要時進行加熱溶解操作,其加熱溫度也不要過高時間不要過長,主要原因是高溫會破壞瓊脂和培養(yǎng)基中的一些營養(yǎng)成分。④生產(chǎn)的干粉培養(yǎng)基和顆粒培養(yǎng)基都經(jīng)過pH校準,使用時無需特殊驗證。因為高壓會影響pH值,則應在高壓后驗證pH值。⑤液體培養(yǎng)基通常是預先包裝好的,分裝時應注意每管的用量不得高于試管的三分之二。⑥高壓后冷卻至五六十度環(huán)境,再導入平板,否則會形成更多的水蒸氣,導致細菌分離數(shù)量。黑龍江Systec培養(yǎng)基制備器
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