配制培養(yǎng)基的原則:根據培養(yǎng)目的需要選擇適宜的營養(yǎng)物質。由于微生物營養(yǎng)類型復雜,不同微生物有不同的營養(yǎng)要求。因此,要根據不同微生物的營養(yǎng)需求選擇適宜的營養(yǎng)物質,配制針對性強的培養(yǎng)基。自養(yǎng)微生物有較強的合成能力,能以簡單的無機物如co2和無機鹽合成復雜的細胞物質。因此,培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應由簡單的無機物組成。異養(yǎng)微生物的合成能力較弱,不能以CO2作為碳源或主要碳源,故應在培養(yǎng)基中至少添加一種有機物。注意營養(yǎng)物質的濃度與配比要合適:微生物只有在營養(yǎng)物質濃度及其比例合適時才能良好生長。營養(yǎng)物質濃度過低不能滿足現生長需要,過高又抑制其生長。例如,適量的蔗糖是異養(yǎng)微生物的良好碳源和能源,但高濃度蔗糖則抑制菌體生長。金屬離子是微生物生長所不可缺少的礦質養(yǎng)分,但濃度擴大,尤其是重金屬離子,反而抑制其生長,甚至產生殺菌作用。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性。上海自動培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基中血清的質量標準:血清質量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數之內,取材過程應嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定?!队脛游锛毎w外培養(yǎng)生產生物制品規(guī)程》中的要求:牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當的監(jiān)測系統。有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物。血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。對細胞有良好的支持繁殖作用。中國香港觸摸屏培養(yǎng)基制備器一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。
培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。另外,應將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴格分開,并有各自獨自的空氣凈化系統及孵室,有毒區(qū)對無毒區(qū)應保持相對負壓,防止病毒對培養(yǎng)細胞(尤其是細胞庫)的污染。
培養(yǎng)基的化學成分包括水、無機鹽、碳源、氮源(生長因子)等。(1)碳源:能為微生物的代謝提供碳元素的物質。如CO2、NaHCO3等無機碳源;糖類、石油、花生粉餅等有機碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機碳源。單質碳不能作為碳源。(2)氮源:能為微生物的代謝提供氮元素的物質。如N2、NH3、NO3-、NH4+(無機氮源)蛋白質、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有機氮源)等。只有固氮微生物才能利用N2。培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對PH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。例如,培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素,培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基的pH調至酸性,培養(yǎng)細菌是需要將pH調至中性或微堿性,培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質變性從而達到殺死微生物的效果。
培養(yǎng)基制備器:1.操作簡單,安全可靠。溫度和壓力嚴格控制鎖定裝載艙口和外部蓋子,不存在意外打開,保證了環(huán)境和操作者的安全。內部的管道和容器可以更換,方便移除和清洗。每一款MediaPrep高壓滅菌器都是這樣裝配和控制的,是一種標準配置。2.高效而強大的加熱和制冷系統功能強大的加熱器,能夠迅速加熱;快速制冷是通過循環(huán)水和壓力(加入內部的軟化水產生的)所進行的。利用與外部水連接的盤狀熱交換器,能夠使內部迅速冷卻,整個過程包括:加熱、滅菌和冷卻(至50°C),依據容器的大小、培養(yǎng)基的數量和冷卻水的溫度,只需60-120分鐘即可完成。負載的壓力,有效地避免了培養(yǎng)基過溫失效和培養(yǎng)基中氣泡的產生??諝鈮嚎s機是內置的。全自動控制程序,確保內部溫度均一,從而保證了配制和滅菌的培養(yǎng)基具有更高的質量,整個過程,在一個設定溫度內,從初的加熱到混合和滅菌,后到冷卻,都是微處理器控制的,而且滅菌之后保持的溫度是可以預設的。殺菌劑裝入口寬大,并附有保險鎖。殺菌劑可從此口加入,也可用注射器從硅酮膜注入。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質,易被污染或變質。河北實驗室培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的分裝:培養(yǎng)基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。上海自動培養(yǎng)基制備器
無菌補料:通過分裝口可以定量添加無菌添加劑。大尺寸的分裝口帶有安全鎖。通過使用一個瓶子將添加劑添加到分裝開口或通過一個septum膜,使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。無菌分裝:培養(yǎng)基制備器的分裝口可以在分裝的時候打開,用于無菌分裝培養(yǎng)基。硅膠管是使用分裝接頭連接到分裝口。為了確保培養(yǎng)基的無菌分裝,硅膠管和分裝接頭必須提前在滅菌器中滅菌。培養(yǎng)基可以通過集成的空壓機產生的無菌空氣壓力分裝或通過連接到常見的蠕動泵或其他集成成泵的裝置,來進行培養(yǎng)基的分裝。上海自動培養(yǎng)基制備器