培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項:1.培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂.較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后.還應(yīng)進行一次檢查。2.培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化.也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動,以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。培養(yǎng)基制備器解凍血清時,請按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)。海南培養(yǎng)基制備器安裝調(diào)試
制備培養(yǎng)基的小技巧1.培養(yǎng)基可按制備也可使用按生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基,脫水培養(yǎng)基除附有和使用說明外還應(yīng)注明有效期、貯存條件、適用性試驗的質(zhì)控菌株和用途。配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作,受潮結(jié)塊不能使用,以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求。2.配制培養(yǎng)基使用的容器應(yīng)是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角燒瓶、刻度吸管、試管、培養(yǎng)皿等。使用的器皿應(yīng)洗凈,用蒸餾水沖凈,烘干后方可使用。禁用金屬容器如鐵、銅、鋁容器,避免金屬離子與培養(yǎng)基成分結(jié)合,生成有害物質(zhì),影響細(xì)菌生長。湖南培養(yǎng)基制備器價格培養(yǎng)基制備器外控高低電平控制啟停,正反,簡易分裝,光耦隔離;外控模擬量調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速。
配制培養(yǎng)基的原則:滅菌處理:為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養(yǎng)物,培養(yǎng)基必須及時嚴(yán)格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa(110℃)滅菌20~30min某些對糖類要求更高的培養(yǎng)基,可先將糖過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。長時間高溫滅菌也會使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽離子形成難溶性化合物而產(chǎn)生沉淀。為了防止這類沉淀發(fā)生,可將這些物質(zhì)分別滅菌,冷卻后再混合;也可在培養(yǎng)基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡(luò)合物,防止沉淀的產(chǎn)生。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低,應(yīng)在配制培養(yǎng)基時加以調(diào)節(jié)。
調(diào)pH:雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì)成分,能使培養(yǎng)基的pH盡可能的保持在要求的范圍內(nèi),但是配出的培養(yǎng)基若不符合要求,就要進行必要的調(diào)整。如果有已校準(zhǔn)pH計,可用pH計。如果沒有,可用精密的pH試紙,再根據(jù)需要用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸(微調(diào)可用0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸)調(diào)制所需的pH。培養(yǎng)基的pH一般為7.4~7.6,也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調(diào)整的需要高壓滅菌的培養(yǎng)基,在調(diào)整pH時要調(diào)至高出所需0.1個~0.2個單位,因用氫氧化鈉提哦啊正時,高壓滅菌后,培養(yǎng)基大的pH要降低0.1~0.2。如培養(yǎng)基中含有碳酸鈣成分,可不調(diào)pH。培養(yǎng)基制備器試管塞不要塞得太緊(使用硅膠塞的時候),勿使用橡皮塞。
培養(yǎng)基的過濾澄清:液體培養(yǎng)基必須較全澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應(yīng)拆疊成折扇成漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復(fù)過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55-60℃的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi),裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養(yǎng)基加入1-2個雞蛋的蛋白.強力振搖3-5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。培養(yǎng)基制備器開始運行樣品量配器并根據(jù)培養(yǎng)基的黏度調(diào)整樣品劑量。湖北培養(yǎng)基制備器廠家
制備培養(yǎng)基的操作要點:半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。海南培養(yǎng)基制備器安裝調(diào)試
培養(yǎng)基的滅菌:培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養(yǎng)基的滅菌時間和壓力,按其成分不同而定。普通培養(yǎng)基采用121℃、滅菌15min,但容器和裝量較大時,應(yīng)延長至20min。含糖培養(yǎng)基115℃、滅菌30min。含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續(xù)3d,間歇滅菌。血清或組織液,采用低熱56—58水浴1h,連續(xù)5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等,可用細(xì)菌過濾器,過濾除菌。高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣,再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時間,達到全部殺滅微生物。以上的滅菌時間和溫度要經(jīng)過驗證確認(rèn),如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時宜采用115℃、滅菌30min為好。海南培養(yǎng)基制備器安裝調(diào)試