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培養(yǎng)基的分裝:培養(yǎng)基的分裝,應(yīng)按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時(shí)好好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí),分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌,以為測(cè)定該批培養(yǎng)基好終pH之用。選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。浙江培養(yǎng)基制備器哪個(gè)品牌好
在制備培養(yǎng)基時(shí),通常要考慮以下因素:1.緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對(duì)培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。2.滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點(diǎn)降低或蒸汽壓升高測(cè)定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過測(cè)定滲透壓防止3.粘度培養(yǎng)基的粘度主要受血清含量的影響,在多數(shù)情況下,對(duì)細(xì)胞生長沒有什么影響。在攪拌條件下,用羧甲基纖維素增加培養(yǎng)基的粘度,可減輕細(xì)胞損害。這對(duì)在低血清濃度或無血清下條件下培養(yǎng)細(xì)胞顯得尤為重要。重慶不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基配成后一般需測(cè)試并調(diào)節(jié)pH,還須進(jìn)行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。
三角培養(yǎng)瓶是細(xì)胞培養(yǎng)中的常用耗材,也可用于培養(yǎng)基的配制、混合及儲(chǔ)存。利用三角培養(yǎng)瓶制備培養(yǎng)基可以按照以下步驟操作:配料:配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。溶解:淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀。加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。調(diào)PH:用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。過濾:濾紙或棉花進(jìn)行過濾。分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。三角培養(yǎng)瓶:若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角培養(yǎng)瓶,很多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度;固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。
培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項(xiàng):1、培養(yǎng)基成分的稱取:培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂,較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方面軍做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。2、培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼萵加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:(1)方法步驟:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟:①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5~10min。然后,將平板倒過來放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。培養(yǎng)基制備器完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。浙江培養(yǎng)基制備器哪個(gè)品牌好
培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基,培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。浙江培養(yǎng)基制備器哪個(gè)品牌好
培養(yǎng)基防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng):確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細(xì)菌、病菌及支原體無菌試驗(yàn)來確認(rèn)并排除。同時(shí)要對(duì)無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時(shí)即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,確保滅菌和除菌效果;前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個(gè)月進(jìn)行驗(yàn)證,后者應(yīng)在每次除菌前、后進(jìn)行驗(yàn)證工作(至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次)。另外,應(yīng)將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴(yán)格分開,并有各自自立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對(duì)無毒區(qū)應(yīng)保持相對(duì)負(fù)壓,防止病毒對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞(尤其是細(xì)胞庫)的污染。浙江培養(yǎng)基制備器哪個(gè)品牌好