血清培養(yǎng)基主要問題:血清的成份可能有幾百種之多,對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認(rèn)識,這給研究工作帶來許多困難。血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。對大多數(shù)細胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞)。培養(yǎng)基的滅菌:一般培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。福建自動攪拌培養(yǎng)基制備器
Systec培養(yǎng)基準(zhǔn)備器可以快速的準(zhǔn)備好滅菌,放入滅菌鍋,“水套系統(tǒng)”里加入夾層水(滅菌鍋與滅菌鍋腔體之間的夾套水用于有效的熱傳導(dǎo)),加入培養(yǎng)基原料,準(zhǔn)備啟動滅菌程序。培養(yǎng)基可以直接在Sampleprep內(nèi)懸浮溶解。強力磁力攪拌確保培養(yǎng)基在內(nèi)腔里混合的均勻性,并防止凝結(jié)。培養(yǎng)基可以在滅菌前用WATERBATH(水?。┠J筋A(yù)先溶解。同時,直觀的圖形化界面使沒有經(jīng)過專門培訓(xùn)的人員也能方便的操作。用戶可以自定義設(shè)置多達50個滅菌程序,比如滅菌溫度、時間、分裝溫度等。它們可以被儲存起來并隨時調(diào)用。寧夏不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:不會產(chǎn)生氣泡。
培養(yǎng)基的類型-根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來區(qū)分,可以分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。1)液體培養(yǎng)基所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的,其中的成分基本上溶于水,沒有明顯的固形物,液體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分分布均勻,易于控制微生物的生長代謝狀態(tài)。2)固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等,以瓊脂較為常用。固體培養(yǎng)基在實際中用得十分多方面。在實驗室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗雜菌、計數(shù)、保藏、生物測定等。3)半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養(yǎng)基有時可用來觀察微生物的動力,有時用來保藏菌種。
實驗室在制作培養(yǎng)基時候的經(jīng)驗總結(jié):1、培養(yǎng)基pH值的調(diào)正:pH因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進行pH的初步調(diào)正。例如,牛肉浸液約可降低pH0.2,而腸浸液pH卻會有明顯的升高。因此,對這個步驟,操作者應(yīng)隨時注意探索經(jīng)驗、以期能掌握培養(yǎng)基的較終pH,保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)整后,還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。2、培養(yǎng)基過濾澄清:液體培養(yǎng)基必須澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。培養(yǎng)基制備器系統(tǒng)自動調(diào)整供給樣品劑量保證了重現(xiàn)性結(jié)果。
分接觸和利用培養(yǎng)基中的養(yǎng)料,適于作生理等研究,由于發(fā)酵率高,操作、方便,也常用于發(fā)酵工業(yè)。(3)半固體培養(yǎng)基。是在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑而呈半固體狀態(tài)。固體培養(yǎng)基的制作步驟:1、首先我們要準(zhǔn)備好一個裝有1000ml的燒杯,然后在準(zhǔn)備好的杯中在放入500ml的蒸餾水,在將牛肉膏和蛋白胨、氯化鈉這些都溶解在水中。2、其次我們在調(diào)節(jié)PH值,調(diào)節(jié)時需要百分之10的氫氧化鈉溶液,將PH值調(diào)到7.2,在此也要定容到1000ml,較后在將這些液體都分別放入10個錐形瓶內(nèi),每一瓶都裝100ml。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。寧夏不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器
一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。福建自動攪拌培養(yǎng)基制備器
對LST(月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯)培養(yǎng)基進行滅菌時,有時發(fā)酵管內(nèi)會有氣泡。為防止發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)生氣泡,可以采取以下幾項措施:(1)小倒管浸滿培養(yǎng)基(不留氣泡)后再加入到盛LST的試管中。(2)滅菌鍋關(guān)閉放氣閥前,將鍋內(nèi)氣體排干凈。(3)試管塞不要塞得太緊(使用硅膠塞的時候),勿使用橡皮塞。(4)不要過早打開滅菌鍋,要等滅菌鍋內(nèi)氣體和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋。如果以上情況都做到還有氣泡,可用水做培養(yǎng)基組的對照試驗,若培養(yǎng)基組有氣泡,而對照組沒有氣泡,可確定是培養(yǎng)基自身的原因。福建自動攪拌培養(yǎng)基制備器