培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:1.pH的測定和調(diào)整:用pH計(jì)測定pH,必要時(shí)在滅菌前調(diào)節(jié)pH,除特殊說明外,培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時(shí),要求pH的變化不超過0.2pH單位.通常使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH。如果滅菌后調(diào)節(jié)pH,溶液需滅菌。注:商品化培養(yǎng)基在高壓滅菌前后pH可能發(fā)生明顯變化,但使用蒸餾水或去離子水時(shí),滅菌前無需調(diào)節(jié)pH。2.分裝:將配置好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦?,容器的體積至少為體積的1.2倍。液體培養(yǎng)基在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周圍,形成透過養(yǎng)分的壁障,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。浙江實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器
MS培養(yǎng)基的特點(diǎn):MS培養(yǎng)基普遍被使用,它的無機(jī)鹽濃度較高,十分有利于組織生長所需的礦質(zhì)營養(yǎng)和加速愈傷組織的生長。因?yàn)榕浞街械碾x子濃度高,在配制、貯存、消毒等過程中,即使有些成分略有出入,也不會對離子間的平衡造成比較大的影響。MS固體培養(yǎng)基可以用來對愈傷組織可以進(jìn)行誘導(dǎo),或者用來培養(yǎng)胚、莖段、莖尖及花藥。在進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí),它的液體培養(yǎng)基能夠得到非常明顯的效果。在這種培養(yǎng)基中,有比較適當(dāng)比例和數(shù)量的無機(jī)養(yǎng)分,能夠滿足植物細(xì)胞在營養(yǎng)上和生理上的需要。所以,通常情形下,氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機(jī)附加成分不需要再被添加。MS培養(yǎng)基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量相比于其它培養(yǎng)基的基本成分要更加的高,這亦是其的明顯特征。自動培養(yǎng)基制備器價(jià)格固體培養(yǎng)基,一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。
培養(yǎng)基的安全分裝:無菌補(bǔ)料:通過分裝口可以定量添加無菌添加劑。大尺寸的分裝口帶有安全鎖。通過使用一個(gè)瓶子將添加劑添加到分裝開口或通過一個(gè)septum膜,使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加。無菌分裝:培養(yǎng)基制備器的分裝口可以在分裝的時(shí)候打開,用于無菌分裝培養(yǎng)基。硅膠管是使用分裝接頭連接到分裝口。為了確保培養(yǎng)基的無菌分裝,硅膠管和分裝接頭必須提前在滅菌器中滅菌。培養(yǎng)基可以通過集成的空壓機(jī)產(chǎn)生的無菌空氣壓力分裝或通過連接到常見的蠕動泵或其他集成成泵的裝置,來進(jìn)行培養(yǎng)基的分裝。分裝選項(xiàng):制備和滅菌過的培養(yǎng)基可以通過一個(gè)軟管進(jìn)行分裝。在每次滅菌進(jìn)程中,內(nèi)吸管和分裝口也通過進(jìn)入的蒸汽進(jìn)行了滅菌。分裝軟管和連接到該軟管的分裝接頭必須使用合適的蒸汽滅菌工藝預(yù)先滅菌,并且必須在無菌條件下連接到分裝口。
培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:1.水:除特定要求,實(shí)驗(yàn)室用水的電導(dǎo)率在25℃下應(yīng)不高于25uS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4MΩcm)。微生物污染應(yīng)不超過103CFU/mL,較好低于102CFU/mL。應(yīng)根GB/T5750.12或其他有效方法,定期檢驗(yàn)微生物的污染。2.稱量和復(fù)水:稱量所需量的脫水培養(yǎng)基(注意防止吸入粉末,尤其是含有有害物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊)后再加水至所需的量。3.溶解和分裝:脫水培養(yǎng)基加水后適當(dāng)加熱,并不攪拌使其快速溶解,必要時(shí),重新溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱溶解前應(yīng)浸泡幾分鐘。為防止冷凝水過多,也可將培養(yǎng)基冷卻至45 ~ 50°C再倒平板。
什么是細(xì)胞培養(yǎng):細(xì)胞培養(yǎng)是指從動物或植物中提取細(xì)胞,然后在人工環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)以進(jìn)行科學(xué)研究。較早的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是在100多年前開發(fā)的,為科學(xué)的巨大突破做出了貢獻(xiàn)。如今,它已成為全世界實(shí)驗(yàn)室用于研究細(xì)胞的生理學(xué)、生物化學(xué)、疾病潛在機(jī)制以及藥物和有毒化合物的作用的基本工具。它也可用于在藥物篩選和大規(guī)模制造生物化合物,諸如疫苗和治病性蛋白質(zhì)。貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置1天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌。自動培養(yǎng)基制備器價(jià)格
培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。浙江實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器
制備的方法和注意事項(xiàng):1培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對,再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。2培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,好終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳椋瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。浙江實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器