天然培養(yǎng)基是指來(lái)自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期,體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過(guò)程復(fù)雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。較廣使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。血清種類:目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因:來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量很大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。培養(yǎng)基制備器滅菌之后保持的溫度是可以預(yù)設(shè)的。殺菌劑裝入口寬大,并附有保險(xiǎn)鎖。湖北實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的滅菌:培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和壓力,按其成分不同而定。普通培養(yǎng)基采用121℃、滅菌15min,但容器和裝量較大時(shí),應(yīng)延長(zhǎng)至20min。含糖培養(yǎng)基115℃、滅菌30min。含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動(dòng)蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續(xù)3d,間歇滅菌。血清或組織液,采用低熱56—58水浴1h,連續(xù)5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等,可用細(xì)菌過(guò)濾器,過(guò)濾除菌。高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣,再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時(shí)間,達(dá)到全部殺滅微生物。以上的滅菌時(shí)間和溫度要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證確認(rèn),如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時(shí)宜采用115℃、滅菌30min為好。寧夏大容量 培養(yǎng)基制備器天然培養(yǎng)基是指一類利用動(dòng)物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基制備器:主要應(yīng)用于液體培養(yǎng)基及微生物培養(yǎng)基的培養(yǎng)基制備器。高效的加熱和冷卻,良好的加熱元件能確??焖偌訜?。培養(yǎng)基容器外壁的水循環(huán)能保證快速冷卻。通過(guò)熱交換器不斷地將熱的去離子水冷卻??傃h(huán)時(shí)間為60至120分鐘,包括加熱、滅菌和冷卻,具體時(shí)間取決于容器的大小,培養(yǎng)基的量和冷卻水的溫度。無(wú)菌過(guò)濾的支持壓力可以防止培養(yǎng)基發(fā)泡或溢沸。觸摸屏技術(shù),新使滅菌器操作起來(lái)有了更多的選擇,增加了靈活性。加塞后,將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞,其外再用一道線繩或橡皮筋扎好,用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。
天然培養(yǎng)基中血清主要作用:提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。提供和各種生長(zhǎng)因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)(氫化可的松、)、類固醇(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。固體培養(yǎng)基,一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)室在制作培養(yǎng)基時(shí)候的經(jīng)驗(yàn)總結(jié):1、培養(yǎng)基成份稱量:培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂,較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。2、培養(yǎng)基成份的混合與溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。較好使用不銹鋼加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置于高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)不同的微生物必須采用不同的培養(yǎng)條件;培養(yǎng)目的不同,原料的選擇和配比不同。大容量 培養(yǎng)基制備器價(jià)格
培養(yǎng)基制備器不存在意外打開(kāi),保證了環(huán)境和操作者的安全。湖北實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備操作步驟:(一)準(zhǔn)確稱量試劑根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。(二)校正pH值將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補(bǔ)充水分,測(cè)定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1NNaOH和1NHCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。(三)過(guò)濾將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。(四)分裝將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。(五)滅菌培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到徹底滅菌的目的。湖北實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器