培養(yǎng)基的配制:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方稱取各種藥品,加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3、調(diào)PH:用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。4、過濾:濾紙或棉花進(jìn)行過濾。5、分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。(1)三角瓶:若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,較多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。(2)試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度。固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。6、包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。7、滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會(huì)被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌。不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器廠家
培養(yǎng)基的性能測(cè)試:外觀控制:制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色,一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化,是否蒸發(fā)/脫水。污染控制:從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測(cè)試(空白試驗(yàn)),確定無微生物生長方可使用。同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對(duì),再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號(hào),很終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。福建自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器全自動(dòng)培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng):運(yùn)行過程順滑無聲;大程度的削減了噪音。
微生物發(fā)酵培養(yǎng)基配制注意事項(xiàng):①養(yǎng)分濃度和配比合適:微生物只有在培養(yǎng)基中養(yǎng)分濃度合適的情況下才能生長良好是合適的。當(dāng)養(yǎng)分濃度過低時(shí),不能滿足微生物正常生長的需要。②微生物培養(yǎng)基pH條件控制:培養(yǎng)基的pH必須控制在一定范圍內(nèi),以滿足不同種類微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝物。各種微生物生長繁殖或代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的較佳pH條件不同。通常細(xì)菌和放線菌適合在7~7.5pH范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌一般在4.5~6pH范圍內(nèi)生長。③微生物培養(yǎng)基原料來源選擇:培養(yǎng)基配制時(shí),應(yīng)盡可能使用低廉易得的原料作為培養(yǎng)基成分。尤其在發(fā)酵行業(yè),培養(yǎng)基用量大,使用成本較低原料實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品附加價(jià)值。例如在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)過程中,制糖業(yè)含蔗糖廢液、乳業(yè)含乳糖廢液、大豆廢液工業(yè)和黑色廢物、造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸鹽紙漿等經(jīng)常被作為培養(yǎng)基原料使用。④成品培養(yǎng)基滅菌處理、為了獲得微生物的純培養(yǎng)物,必須避免被細(xì)菌污染,所以對(duì)使用的設(shè)備和工作場所進(jìn)行消毒和消毒。對(duì)于微生物培養(yǎng)基要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理。
培養(yǎng)基的過濾澄清:液體培養(yǎng)基必須較全澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應(yīng)拆疊成折扇成漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復(fù)過濾。如過濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55-60℃的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi),裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養(yǎng)基加入1-2個(gè)雞蛋的蛋白.強(qiáng)力振搖3-5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。液體培養(yǎng)基:為確定液體培養(yǎng)基的生長率,應(yīng)接種適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)物。
培養(yǎng)基防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng):確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細(xì)菌、病菌及支原體無菌試驗(yàn)來確認(rèn)并排除。同時(shí)要對(duì)無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時(shí)即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,確保滅菌和除菌效果;前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個(gè)月進(jìn)行驗(yàn)證,后者應(yīng)在每次除菌前、后進(jìn)行驗(yàn)證工作(至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次)。另外,應(yīng)將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴(yán)格分開,并有各自自立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室,有毒區(qū)對(duì)無毒區(qū)應(yīng)保持相對(duì)負(fù)壓,防止病毒對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞(尤其是細(xì)胞庫)的污染。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn):滅菌-加熱-攪拌-混合-冷卻一體化控制。甘肅培養(yǎng)基制備器報(bào)價(jià)
紫外線作用于核酸蛋白促使其變性,同時(shí)空氣受紫外線照射后產(chǎn)生微量臭氧,從而起共同殺菌作用。不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器廠家
配制培養(yǎng)基應(yīng)遵循的幾個(gè)原則:1、目的明確:培養(yǎng)不同的微生物必須采用不同的培養(yǎng)條件;培養(yǎng)目的不同,原料的選擇和配比不同;2、營養(yǎng)協(xié)調(diào):微生物細(xì)胞組成元素的調(diào)查或分析,是設(shè)計(jì)培養(yǎng)基時(shí)的重要參考依據(jù),微生物細(xì)胞內(nèi)各種成分間有一較穩(wěn)定的比例。3、理化適宜:指培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢(shì)等物理化學(xué)條件較為適宜。4、經(jīng)濟(jì)節(jié)約:配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成份,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,以降低生產(chǎn)成本。不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器廠家