種子培養(yǎng)基:種子培養(yǎng)基是供孢子發(fā)芽、生長和大量繁殖菌絲體,并使菌體長得粗壯,成為活力強的“種子”。所以種子培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分要求比較豐富和完全,氮源和維生素的含量也要高些,但總濃度以略稀薄為好,這樣可達到較高的溶解氧,供大量菌體生長繁殖。種子培養(yǎng)基的成分要考慮在微生物代謝過程中能維持穩(wěn)定的pH,其組成還要根據(jù)不同菌種的生理特征而定。一般種子培養(yǎng)基都用營養(yǎng)豐富而完全的天然有機氮源,因為有些氨基酸能刺激孢子發(fā)芽。但無機氮源容易利用,有利于菌體迅速生長,所以在種子培養(yǎng)基中常包括有機及無機氮源。較后一級的種子培養(yǎng)基的成分好好能較接近發(fā)酵培養(yǎng)基,這樣可使種子進入發(fā)酵培養(yǎng)基后能迅速適應(yīng),快速生長。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:不會產(chǎn)生氣泡。中國澳門培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器
制備培養(yǎng)基有什么要求:1、培養(yǎng)基需保持澄清,便于觀察細菌的生長情況,培養(yǎng)基加熱煮沸后,可用脫脂棉花或絨布過濾,以除去沉淀物,必要時可用雞蛋白澄清處理,所用瓊脂條要預(yù)先洗凈晾干后使用,避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。2、盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器,使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。3、培養(yǎng)基的滅菌既要達到完全滅菌目的,又要注意不因加熱而降低其營養(yǎng)價值,121℃15min即可,如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類、血清、明膠等,則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌,一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、克菌素等,待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。海南自動培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基制備器溫度和壓力嚴格控制鎖定裝載艙口和外部蓋子。
消毒與滅菌的區(qū)別:消毒指使用較為溫和的物理或化學方法單殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(對于一些不耐高溫的液體)還有化學藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法:①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法;②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱;③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。
配制培養(yǎng)基的原則:滅菌處理:為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養(yǎng)物,培養(yǎng)基必須及時嚴格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa(110℃)滅菌20~30min某些對糖類要求更高的培養(yǎng)基,可先將糖過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。長時間高溫滅菌也會使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽離子形成難溶性化合物而產(chǎn)生沉淀。為了防止這類沉淀發(fā)生,可將這些物質(zhì)分別滅菌,冷卻后再混合;也可在培養(yǎng)基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡(luò)合物,防止沉淀的產(chǎn)生。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低,應(yīng)在配制培養(yǎng)基時加以調(diào)節(jié)。培養(yǎng)基制備器全自動控制程序,確保內(nèi)部溫度均一。
培養(yǎng)基的制備步驟有哪些:第1,用水:培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水,較好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。第二,稱量。稱量時要用獨有的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果;干粉培養(yǎng)基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。第三,復水,復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養(yǎng)基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養(yǎng)基溢出;含有瓊脂粉的培養(yǎng)基,在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘;加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養(yǎng)基較好使用沸水浴進行加熱。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:容器可自行拆卸更換和消毒,操作方便。湖南瓊脂培養(yǎng)基 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器解凍血清時,請按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)。中國澳門培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的滅菌:一般培養(yǎng)基可采用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中,如無特殊規(guī)定,即可用此法滅菌。某些畏熱成分,如糖類,應(yīng)另行配成20%如或更高的濃液,以過濾或間歇滅菌法消毒,以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和物品等則應(yīng)從無菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50℃左右的培養(yǎng)基中。瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出、待冷至55-60℃時,擺置成適當斜面、待其自然凝固。中國澳門培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器