報告基因選用GFP或RFP，**小啟動子來自斑馬魚gata2基因；將上述載體與體外轉(zhuǎn)錄得到的Tol2轉(zhuǎn)座酶的mRNA共同注射到斑馬魚的單細(xì)胞受精卵中，受精卵長大后成為founder；Founder外交（out-cross）得到F1代胚胎，從中挑選出對于報告基因具有組織特異性表達(dá)模式的胚胎，拍照記錄后分類培養(yǎng)；F1長大后通過linker-mediatedPCR的方法鑒定對應(yīng)于GFP（或RFP）表達(dá)圖式的Tol2插入位點，并通過與已知基因組數(shù)據(jù)比較，對插入位點進(jìn)行定位與分析；通過外交純化得到轉(zhuǎn)基因魚，直至得到只含有單個插入品系的轉(zhuǎn)基因魚。斑馬魚實驗提高藥物研發(fā)效率。湖南斑馬魚實驗動物模型

斑馬魚基因敲除品系制備服務(wù)簡介1.基因敲除(GeneKnockout)根據(jù)給定GeneID或Genename，分析基因保守結(jié)構(gòu)域，在保守結(jié)構(gòu)域或客戶指定區(qū)域設(shè)計靶點并制備靶點gRNA，gRNA和Cas9共注射使基因產(chǎn)生移碼突變，通過PCR篩選得到穩(wěn)定遺傳品系。2.基因敲除技術(shù)特點2.1通過將基因敲除斑馬魚品系與野生型相比較，研究者可以揭示特定基因的功能。2.2在基因組水平上將目標(biāo)基因敲除，遺傳背景干凈清晰，是研究基因功能的金標(biāo)準(zhǔn)。服務(wù)流程▲根據(jù)客戶提供的GeneID或Genename進(jìn)行基因分析——▲cas9mRNA和多個gRNA靶點的設(shè)計及合成——▲高效gRNA靶點的篩選及效率驗證——▲F0代斑馬魚的可遺傳性篩選——▲雜合子F1代斑馬魚的基因型鑒定環(huán)特生物優(yōu)勢成熟的基因敲除技術(shù)快速獲得穩(wěn)定品系；多靶點共注射F0代驗證基因功能。陜西斑馬魚實驗的可靠性使用斑馬魚實驗數(shù)據(jù)申報 CFDA 臨床試驗。

斑馬魚是功能基因組是科學(xué)研究中比較重要的模式生物之一，已經(jīng)推動了遺傳學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、分子細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)和疾病研究等多個領(lǐng)域的研究與應(yīng)用發(fā)展。斑馬魚具有胚胎透明、體外發(fā)育等特點，在受精后48小時內(nèi)基本形成，所有發(fā)育階段的胚胎均可在顯微鏡下操作和觀測，不但可以直接觀察和追蹤基因和細(xì)胞在發(fā)育中的行為，而且易于在整體動物模型中研究其調(diào)控機制。斑馬魚個體小，易于低成本地在實驗室大量養(yǎng)殖，遺傳學(xué)和胚胎學(xué)操作比小鼠等哺乳動物模型更易于掌握，適合多種疾病模型的建立。另外，斑馬魚胚胎產(chǎn)量高，可以用高通量方法篩選與基因和細(xì)胞功能相關(guān)的小分子化合物。

身體透明，斑馬魚在發(fā)育的前7天身體透明，可直接觀察內(nèi)部***。結(jié)合***染料、抗體、核酸探針等方法能夠觀察自由活動的或者固定后的斑馬魚***樣本，這種直接的觀察為自動化藥物篩選和藥物靶***鑒別奠定了堅實有利的基礎(chǔ)。斑馬魚和人類的疾病信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路高度保守。斑馬魚體內(nèi)存在的人類同源基因比例高達(dá)87%，某些疾病相關(guān)基因與人類基因保守性高達(dá)99%,這意味著在其身上做藥物實驗所得到的結(jié)果在多數(shù)情況下也適用于人體。在已知生物中，魚類是**早具備獲得性免疫系統(tǒng)的綱。這就使得對斑馬魚免疫系統(tǒng)的研究成為人們了解非特異性免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)進(jìn)化與功能相互關(guān)系的重要工具。這個獨特的免疫系統(tǒng)進(jìn)化地位還賦予了斑馬魚作為免疫學(xué)研究模式生物的另一重要優(yōu)勢，即其成體可以在沒有胸腺、淋巴細(xì)胞生成的情況下存活傳代。斑馬魚實驗的常見問題。

成功除了努力還需要借助科學(xué)的方法和先進(jìn)的工具。斑馬魚模型的獨特優(yōu)勢使其能夠?qū)ΜF(xiàn)有的有體外實驗和哺乳動物組成的傳統(tǒng)藥物研發(fā)模式，斑馬魚既可以作為體外實驗和哺乳動物實驗之間的橋梁，在早期淘汰大量成***不佳的候選化合物，減少哺乳動物實驗階段的時間和費用成本。同時，一些靠現(xiàn)有方法很難解決的藥效和安全性評價模型可以通過斑馬魚來解決，打破實驗技術(shù)方面的瓶頸和束縛；另外，利用斑馬魚模型，我們可以在一些特定靶向藥物的開發(fā)上采用新的研發(fā)模式，從斑馬魚篩選開始，將活性與安全性較好候選化合物篩選出來后，同時開展體外機制研究和哺乳動物體內(nèi)實驗，通過這種模式，可以大幅縮短早期研發(fā)周期、節(jié)省研發(fā)成本、提高藥物發(fā)現(xiàn)的成功率?；瘜W(xué)品斑馬魚胚胎和卵黃囊仔魚階段的短期毒性試。海南北大關(guān)于斑馬魚實驗

斑馬魚模型和技術(shù)研究。湖南斑馬魚實驗動物模型

保持首先，斑馬魚非常強壯，易于維護(hù)。由于它們是在池塘中自然發(fā)現(xiàn)的，它們的理想條件可以很容易地復(fù)制。他們也很便宜；然而，它們確實需要比其他模型生物如蒼蠅更多的空間。這種模式也是脊椎動物，這使它優(yōu)于其他模式。生殖斑馬魚的繁殖力非常高，每周產(chǎn)數(shù)百個卵。他們也有很短的生成時間，這意味著科學(xué)家有一個永無止境的供應(yīng)這種模式。這縮短了整個實驗過程，并且在突變體生產(chǎn)中特別有用。另一個優(yōu)點是斑馬魚卵是從外部發(fā)育的，科學(xué)家可以很容易地研究它們**初的發(fā)育過程。這是一個優(yōu)于其他模型，如小鼠，發(fā)展內(nèi)部，因此阻礙視覺調(diào)查。湖南斑馬魚實驗動物模型