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怎么建立斑馬魚(yú)模型

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-06-06

斑馬魚(yú)模型既具有體外實(shí)驗(yàn)快速、高效、費(fèi)用低等優(yōu)勢(shì),又具有哺乳類(lèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)預(yù)測(cè)性強(qiáng)、可比度高等優(yōu)點(diǎn),可以有效彌補(bǔ)體外實(shí)驗(yàn)和哺乳類(lèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之間的巨大生物學(xué)斷層,完善現(xiàn)有藥物研發(fā)體系。將斑馬魚(yú)模型魚(yú)體外實(shí)驗(yàn)和哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,可以從整體上縮短藥物臨床前早期研發(fā)的實(shí)驗(yàn)周期,降低實(shí)驗(yàn)成本,提高實(shí)驗(yàn)預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性,進(jìn)而提高藥物研發(fā)效率,降低藥物研發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。全球醫(yī)藥巨頭輝瑞、羅氏、諾華、葛蘭素史克、阿斯利康等都逐漸開(kāi)始使用斑馬魚(yú)技術(shù)進(jìn)行藥物篩選研發(fā)。2009年,斑馬魚(yú)藥物毒理學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù)通過(guò)FDA和EMA的GLP認(rèn)證,這標(biāo)志著斑馬魚(yú)模型的安全藥理學(xué)和毒理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果可以作為正式材料納入臨床試驗(yàn)申報(bào)資料。斑馬魚(yú)可用于人類(lèi)疾病的研究的模式生物。怎么建立斑馬魚(yú)模型

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斑馬魚(yú)作為模式生物的優(yōu)勢(shì)斑馬魚(yú)已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究,也早已應(yīng)用于化學(xué)品安全和環(huán)境毒理學(xué)監(jiān)測(cè)領(lǐng)域。二十世紀(jì)末以來(lái),斑馬魚(yú)開(kāi)始進(jìn)入疾病研究和新藥研發(fā)領(lǐng)域,并收到日益廣泛的關(guān)注。2003年,美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH)將斑馬魚(yú)列為繼小鼠和大鼠后第3大脊椎模式生物;2009年,F(xiàn)DA和EMEA接受用斑馬魚(yú)進(jìn)行的完全學(xué)藥理學(xué)評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)申報(bào)臨床實(shí)驗(yàn),標(biāo)志著斑馬魚(yú)藥物毒理學(xué)與安全性評(píng)價(jià)模型得到了歐美**的正式認(rèn)可;到了2015年,中國(guó)實(shí)驗(yàn)用魚(yú)(斑馬魚(yú))質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)起草啟動(dòng)標(biāo)志著斑馬魚(yú)模型在國(guó)內(nèi)的興起。斑馬魚(yú) 外包公司斑馬魚(yú)模型和技術(shù)研究。

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令人驚奇的是,這種生活在熱帶的魚(yú)還可以“再造”被部分切除的組織,從而為從事修正受損脊髓的研討人員打開(kāi)了方便之門(mén)。現(xiàn)在,斑馬魚(yú)的使用正逐漸拓寬和深化到生命體的多種系統(tǒng)的發(fā)育、功用和疾病的研討中,并用于遺傳學(xué)、藥物學(xué)、毒理學(xué)等諸多方面。在藥品研發(fā)等方面,每年有很多新藥進(jìn)入臨床或者臨床前階段,它們是否對(duì)人體有害需要進(jìn)行科學(xué)的安全點(diǎn)評(píng)?!皩?shí)驗(yàn)新星”斑馬魚(yú)再次擔(dān)當(dāng)重?fù)?dān),斑馬魚(yú)胚胎和幼魚(yú)對(duì)有害物質(zhì)十分敏感,同時(shí)用藥簡(jiǎn)單,只需將藥物放入養(yǎng)殖胚胎的水中或快速打針,用藥量少、測(cè)驗(yàn)周期短。

斑馬魚(yú)敲除品系成功案例1、基因分析分析目的基因的保守結(jié)構(gòu)域;2、靶點(diǎn)篩選設(shè)計(jì)4個(gè)gRNA靶點(diǎn),PCR檢測(cè)包含靶點(diǎn)的區(qū)域真實(shí)序列,顯微注射驗(yàn)證靶點(diǎn)效率;3、大規(guī)模注射養(yǎng)殖F0Cas9pro+gRNA共注射,共養(yǎng)殖F0約80條用于后期Founder篩選;4、Founder篩選F0代斑馬魚(yú)與野生型外交,收集48hpf的F1胚胎抽取基因組,PCR鑒定,測(cè)序結(jié)果在靶點(diǎn)位置出現(xiàn)雙峰的認(rèn)為產(chǎn)生突變,然后TAclone驗(yàn)證其可能產(chǎn)生的突變方式;5、F1代篩選F1代斑馬魚(yú)剪尾篩選,TAclone驗(yàn)證突變方式:斑馬魚(yú)用來(lái)做什么試驗(yàn)?

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以下是多孔板實(shí)驗(yàn)的具體進(jìn)程:1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)設(shè)備和資料多孔板實(shí)驗(yàn)需求一個(gè)容器、一個(gè)多孔板、一些食物和一些斑馬魚(yú)幼魚(yú)。容器應(yīng)足夠大,以包容多個(gè)斑馬魚(yú)幼魚(yú),但不要太大,以免影響幼魚(yú)的行為。多孔板應(yīng)該適合幼魚(yú)的大小,而且可以放置在容器中。食物可以是小顆粒狀的魚(yú)食或其他恰當(dāng)大小的食物。2、練習(xí)斑馬魚(yú)幼魚(yú)在開(kāi)端實(shí)驗(yàn)之前,需求練習(xí)斑馬魚(yú)幼魚(yú),以確保它們知道怎樣通過(guò)多孔板來(lái)獲得食物。為此,可以先將幼魚(yú)放置在一個(gè)沒(méi)有孔的板上,讓它們學(xué)會(huì)在板上找到食物。之后,可以逐步增加孔的數(shù)量和大小,以練習(xí)幼魚(yú)學(xué)會(huì)通過(guò)多孔板獲取食物獎(jiǎng)賞。3、開(kāi)始試驗(yàn):一旦幼魚(yú)學(xué)會(huì)了如何經(jīng)過(guò)多孔板獲取食物獎(jiǎng)賞,就能夠開(kāi)始正式的試驗(yàn)了。首先,將多孔板放置在容器的一端,并將食物放在多孔板的對(duì)面。然后將幼魚(yú)放置在容器的另一端。幼魚(yú)會(huì)測(cè)驗(yàn)經(jīng)過(guò)多孔板來(lái)獲得食物獎(jiǎng)賞。如果幼魚(yú)成功經(jīng)過(guò)多孔板到達(dá)食物,則它們將獲得食物獎(jiǎng)賞。斑馬魚(yú)毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)意義及作用!斑馬魚(yú)功效分析

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當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性DNA損害因子誘發(fā)細(xì)胞DNA鏈斷裂時(shí),其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞,在細(xì)胞裂解液作用下,細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞,細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴(kuò)散到細(xì)胞裂解液中,而核DNA因?yàn)榉肿恿刻笾荒芰粼谠?。在中性條件下,DNA可進(jìn)入凝膠發(fā)生搬遷,而在堿性電解質(zhì)的作用下,DNA發(fā)生解螺旋,損害的DNA斷鏈及片段被釋放出來(lái)。因?yàn)檫@些DNA的分子量小且堿變性為單鏈,所以在電泳過(guò)程中帶負(fù)電荷的DNA會(huì)離開(kāi)核DNA向正極搬遷構(gòu)成“彗星”狀圖像,而未受損害的DNA部分保持球形。DNA受損越嚴(yán)重,發(fā)生的斷鏈和斷片越多,長(zhǎng)度也越小,在相同的電泳條件下搬遷的DNA量就愈多,搬遷的距離就愈長(zhǎng)。通過(guò)測(cè)定DNA搬遷部分的光密度或搬遷長(zhǎng)度就可以測(cè)定單個(gè)細(xì)胞DNA損害程度,然后確認(rèn)受試物的作用劑量與DNA損害效應(yīng)的聯(lián)系。彗星試驗(yàn)檢測(cè)低濃度基因毒物具有高靈敏性,研究的細(xì)胞不需處于有絲分裂期。一起,這種技術(shù)只需要少數(shù)細(xì)胞。怎么建立斑馬魚(yú)模型

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