從雙光子的原理和特點我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點:☆光損傷小:由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,這一波段的光對***細胞和組織的光損傷小,適用于長時間的研究;☆穿透能力強:相對于紫外光,可見光和近紅外光都具有更強的穿透能力,因而受生物組織散射的影響更小,解決對生物組織中深層物質的層析成像研究問題;☆高分辨率:由于雙光子吸收截面很小,只有在焦平面很小的區(qū)域內可以激發(fā)出熒光,雙光子吸收只局限于焦點處的體積約為波長3次方的范圍內;☆漂白區(qū)域小:由于激發(fā)只存在于交點處,所以焦點以外的區(qū)域都不會發(fā)生光漂白現(xiàn)象;☆熒光收集率高:與共聚焦成像相比,雙光子成像不需要光學濾波器(共焦***),這樣就提高了對熒光的收集率,而收集率的提高直接導致圖像對比度的提高;☆圖像對比度高:由于熒光波長小于入射波長,因而瑞利散射產生的背景噪聲只有單光子激發(fā)時的1/16,較大降低了散射的干擾;☆光子躍遷具有很強的選擇激發(fā)性,所以可以對生物組織中一些特殊物質進行成像研究;雙光子顯微鏡大量運營在實驗室當中;布魯克雙光子顯微鏡聯(lián)系方式
雙光子顯微鏡為什么穿透能力強?因為組織對可見光區(qū)域的較強吸收和散射帶來兩個嚴重的問題第1個是激發(fā)光的減弱,第2個就是另外就是由于物鏡本身光的光學特性,單光子激發(fā)的背景較強,所以才有共聚焦系統(tǒng)提高成像的分辨率因為組織對可見光區(qū)域的較強吸收和散射帶來兩個嚴重的問題第1個是激發(fā)光的減弱,第2個就是另外就是由于物鏡本身光的光學特性,單光子激發(fā)的背景較強,所以才有共聚焦系統(tǒng)提高成像的分辨率剛好雙光子在這兩點具有很大的優(yōu)勢上面的內容基本在談到雙光子優(yōu)勢都會相對說明,在實際操作中成像的深度和樣品的關系很大,雙光子成像利用高亮度的熒光標記材料,已經有做到mm級別的穿透深度國內激光熒光雙光子顯微鏡代理商成像平臺倒置雙光子顯微鏡啟用顯微鏡自帶調焦設備。
使用雙光子顯微鏡(2PM)可以以亞細胞分辨率對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器成像,從而測量不透明大腦深處的活動;成像膜電壓變化能直接反映神經元活動,但神經元活動的速度對于常規(guī)的2PM來說太快。目前電壓成像主要通過寬場顯微鏡實現(xiàn),但它的空間分辨率較差并且只是于淺層深度。因此要在不透明的大腦中以高空間分辨率對膜電壓變化進行成像,需要較提高2PM的成像速率。FACED模塊輸出處的子脈沖序列可以看作從虛擬光源陣列發(fā)出的光,這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成了一個空間上分離且時間延遲的焦點陣列。然后將該模塊并入具有高速數據采集系統(tǒng)的標準雙光子熒光顯微鏡中,如圖2所示。光源是具有1MHz重復頻率的920nm的激光器,通過FACED模塊可產生80個脈沖焦點,其脈沖時間間隔為2ns。這些焦點是虛擬源的圖像,虛擬源越遠,物鏡處的光束尺寸越大,焦點越小。光束沿y軸比x軸能更好地充滿物鏡,從而導致x軸的橫向分辨率為0.82μm,y軸的橫向分辨率為0.35μm。
高光子密度帶來的高能量容易損傷細胞,所以雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脈沖達到最大值所持續(xù)的周期只有十萬億分之一秒,而其頻率可以達到80至100兆赫,這樣即能達到雙光子激發(fā)的高光子密度要求,又能不損傷細胞,使掃描能更好地進行。雙光子顯微鏡在各領域研究中已有許多成功實例生物領域:貝爾實驗室的Svoboda等人研究了大腦皮層神經元細胞內鈣離子動力學情形。利用雙光子顯微鏡觀察到的現(xiàn)象證明了鈣離子的增加依賴于肌體觸發(fā)的鈉離子作用電勢。信息領域:美國科學家Rentzepis提出了一種在現(xiàn)有二維光盤的基礎上將數據儲存擴展到三維空間。由于雙光子激發(fā)具有作用精細體積小的特點,避免了層與層之間的互相干擾,極大地提高了數據儲存密度。雙光子顯微鏡觀察到的現(xiàn)象證明了鈣離子的增加依賴于肌體觸發(fā)的鈉離子作用電勢。
共聚焦顯微可以呈現(xiàn)這么漂亮的圖像,是不是什么樣品都可以用共聚焦顯微鏡拍拍拍.....得到各種各樣清晰漂亮的圖像呢?答案是否定的,任何事物都有優(yōu)缺點,何況一臺儀器呢,共聚焦顯微鏡也是有自己的局限,共聚焦有哪些局限呢:1.共聚焦顯微鏡只能拍攝約200um以內的的樣品,對于厚的或者樣品不能進拍攝;2. 共聚焦顯微鏡由于是逐點進行掃描,對樣品的光毒性還是比較大的,特別是拍攝活細胞樣品時就更容易對樣品進行淬滅;3. 由于光照射的區(qū)域幾乎能通過這個Z軸的層面,所以對于空間定點光刺激的實驗定點位置就不是特別精確;并且激光共聚焦顯微鏡沒有純紫外進行激發(fā),對于一些特殊激發(fā)波長的實驗,效率非常低。雙光子顯微鏡的基本原理是:在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時吸收 2 個長波長的光子,在經過一個很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時間后,發(fā)射出一個波長較短的光子;其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的。雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,為了不損傷細胞,雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脈沖寬度只有 100 飛秒,而其周期可以達到 80至100兆赫茲。雙光子顯微鏡能夠在細胞甚至是亞細胞水平上對神經細胞的形態(tài)結構、離子濃度、細胞運動、進行直接成像監(jiān)測。美國investigator雙光子顯微鏡
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隨著現(xiàn)在科學技術的發(fā)展,儀器儀表行業(yè)發(fā)生了突飛猛進的發(fā)展,再加上當前計算機技術、網絡技術的進步和發(fā)展,組建網絡而構成實用的監(jiān)控系統(tǒng),可以提高生產效率和共享信息資源方向發(fā)展。當前儀器儀表行業(yè)產品發(fā)展呈現(xiàn)微型化、多功能化、智能化、網絡化四大發(fā)展趨勢。為迎接服務型百年未有之大變局,行家認為,要重新定義中國在世界經濟版圖中的地位,要順應形勢實現(xiàn)制造升級。以華立集團在境外開發(fā)“中國工業(yè)園”的成功案例來闡述,跨國經營要成為企業(yè)主動的戰(zhàn)略選擇,在不確定性中更好地活下去,以全球化視野看問題,很多困惑在全球化過程中會迎刃而解。隨著手機移動網絡的消費潛力不斷隱現(xiàn),消費者利用手機消費的頻率和份額逐年遞增。移動互聯(lián)網所隱藏的商業(yè)價值被更多地挖掘出來之后,各種傳統(tǒng)行業(yè)(包括nVista,nVoke,3D bioplotte,invivo行業(yè))的移動網上平臺相繼誕生。伴隨移動互聯(lián)網的爆發(fā)式增長,如今,它已經漸漸取代電子商務成為了整個互聯(lián)網產業(yè)增速極快的領域,而移動終端的入口也隨即成為了傳統(tǒng)行業(yè)的必爭之地。nVista,nVoke,3D bioplotte,invivo行業(yè)進軍移動互聯(lián)網實現(xiàn)線上發(fā)展勢在必行。布魯克雙光子顯微鏡聯(lián)系方式
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