2020年,JianglaiWu等人提出提高2PM橫向掃描速率的裝置,稱為FACED(free-spaceangular-chirp-enhanceddelay)。圓柱透鏡將激光束一維聚焦,會聚角為Δθ。光束進入到一對幾乎平行的高反射鏡中,其間距為S,偏角為α。經過反射鏡多次反射后,激光脈沖被分成多個傳播方向不同的子脈沖(N=Δθ/α),脈沖間以2S/c的時間延遲(c,光速)回射。FACED模塊輸出處的子脈沖序列可以看作從虛擬光源陣列發(fā)出的光,這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成了一個空間上分離且時間延遲的焦點陣列。然后將該模塊并入具有高速數(shù)據采集系統(tǒng)的標準雙光子熒光顯微鏡中。光源是具有1MHz重復頻率的920nm的激光器,通過FACED模塊可產生80個脈沖焦點,其脈沖時間間隔為2ns。這些焦點是虛擬源的圖像,虛擬源越遠,物鏡處的光束尺寸越大,焦點越小。光束沿y軸比x軸能更好地充滿物鏡,從而導致x軸的橫向分辨率為0.82μm,y軸的橫向分辨率為0.35μm。顯微鏡簡史:從光到多光子顯微鏡。Ultima Investigator多光子顯微鏡代理商
多光子顯微鏡對成像深度的改善利用紅光或紅外光激發(fā),光散射?。ㄐ×W拥纳⑸渑c波長的四次方的成反比)。不需要***,能更多收集來自成像截面的散射光子。***不能區(qū)分由離焦區(qū)域或焦點區(qū)發(fā)射出的散射光子,多光子在深層成像信噪比好。單光子激發(fā)所用的紫外或可見光在光束到達焦平面之前易被樣品吸收而衰減,不易對深層激發(fā)。多光子熒光成像的特點。深度成像∶與共聚焦相比能更好地對厚散射物質成像。信噪比∶多光子吸收采用的波長是單光子吸收的2倍以上,所以顯微試樣中的瑞利散射更小,熒光測定的信噪比更高。觀察活細胞∶離子測量(i.e.Ca2+),GFP,發(fā)育生物學等—減少了光毒性和光漂白,能對細胞長時間觀察。美國布魯克多光子顯微鏡應用多光子激光掃描顯微鏡更能解決生物組織中深層物質的層析成像問題, 擴大了應用范圍。
1,光源、光路高度整合通過精密的設計,將飛秒激光器、掃描振鏡、PMT、濾光片組,甚至是單光子熒光光路全套整合在一個不大的掃描頭內,無論掃描頭如何移動,掃描頭內的光路都可以保持穩(wěn)定不變,從而實現(xiàn)了超穩(wěn)定、免維護的特點。2,配合多維度、高精度機械控制系統(tǒng)。掃描頭直接架設在一個多維運動的機械裝置上,可沿任意方向和角度移動掃描頭,方便對動物樣本進行多方位的掃描觀察。而這在常規(guī)方案的多光子顯微鏡上有很大的實現(xiàn)難度,不但需要多個關節(jié)組合的光路導向機構,并且在這些關節(jié)旋轉的時候,都冒著極大的光路偏移的風險,以至于在使用一段時間后都需要對光路進行再次校準,而這樣的問題在我司上則完全不會發(fā)生。3.一機多能。
單光子激發(fā)熒光和雙光子激發(fā)熒光,是從熒光產生的機理上來區(qū)分的。而共焦則是熒光顯微鏡的一種結構,其目的是為了,通過共焦結構,提高整個熒光顯微鏡的空間分辨率。所以共焦熒光顯微鏡可以根據激發(fā)光源的不同,實現(xiàn)單光子共焦熒光成像或者雙光子共焦熒光成像。往往一個普通的雙光子熒光顯微鏡(沒有共焦結構)其空間分辨率也可以達到單光子共焦熒光顯微鏡的水平。這樣就可以簡化整個系統(tǒng),相對來說,就提高了激發(fā)光源的利用率,以及熒光的探測效率,這個也是我們提倡雙光子熒光成像的原因之一。雙光子熒光共焦顯微鏡由于雙光子效應和共焦結構,分辨率則會更高,而我們通常說的共焦顯微鏡都是指單光子激發(fā)熒光的。滔博生物多光子顯微鏡廣應用于生命科學、生物醫(yī)學和材料科學領域!
與傳統(tǒng)的單光子寬視野熒光顯微鏡相比,多光子顯微鏡(MPM)具有光學切片和深層成像等功能,這兩個優(yōu)勢極大地促進了研究者們對于完整大腦深處神經的了解與認識。2019年,JeromeLecoq等人從大腦深處的神經元成像、大量神經元成像、高速神經元成像這三個方面論述了相關的MPM技術。想要將神經元活動與復雜行為聯(lián)系起來,通常需要對大腦皮質深層的神經元進行成像,這就要求MPM具有深層成像的能力。激發(fā)和發(fā)射光會被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素,雖然可以通過增加激光強度來解決散射問題,但這會帶來其他問題,例如燒壞樣品、離焦和近表面熒光激發(fā)。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長的波長作為激發(fā)光。中國市場多光子顯微鏡進出口貿易趨勢。美國飛秒激光多光子顯微鏡成像區(qū)域
多光子顯微鏡的發(fā)展現(xiàn)狀及未來發(fā)展趨勢。Ultima Investigator多光子顯微鏡代理商
多光子顯微鏡通過引入具有超高透射率、非常陡峭的邊緣和精心優(yōu)化的阻擋的濾光片,為多光子用戶帶來了增強的性能??紤]到激發(fā)激光器和多光子成像系統(tǒng)的其他復雜元件通常需要多少投資,這些新的光學濾光片**了一種簡單且廉價的升級,可以顯著提高系統(tǒng)性能。事實上,與傳統(tǒng)濾光片的褐**調相比,發(fā)射濾光片看起來像窗戶玻璃一樣清晰,而且LWP二向色鏡具有如此寬的反射帶,它們看起來像高反射鏡。發(fā)射濾光片還在Ti:Sapphire激光調諧范圍內提供深度阻擋,這對于實現(xiàn)高信噪比和測量靈敏度至關重要。Ultima Investigator多光子顯微鏡代理商