鈣成像技術(shù)通常使用熒光染料或報(bào)告基因來(lái)標(biāo)記細(xì)胞中的鈣離子。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時(shí),鈣離子會(huì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),導(dǎo)致熒光染料或報(bào)告基因發(fā)出光信號(hào)。通過(guò)觀察光信號(hào)的強(qiáng)度和分布,可以推斷出鈣離子的濃度和分布情況。鈣成像技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):高靈敏度:可以檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)微小的鈣離子濃度變化。實(shí)時(shí)性:可以實(shí)時(shí)記錄鈣離子濃度的變化過(guò)程。空間分辨率高:可以清晰地觀察到鈣離子在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。無(wú)創(chuàng)性:可以通過(guò)huo體成像技術(shù)觀察動(dòng)物體內(nèi)的鈣離子變化情況。可重復(fù)性:可以對(duì)同一群體細(xì)胞進(jìn)行多次成像,以評(píng)估不同處理或刺激的影響。總之,鈣成像技術(shù)是一種強(qiáng)大的生物醫(yī)學(xué)研究工具,可以幫助科學(xué)家們更好地了解細(xì)胞生理和病理狀態(tài),為疾病診斷和zhi療提供有力支持。鈣成像技術(shù)發(fā)現(xiàn)鈣離子產(chǎn)生各種各樣的胞內(nèi)信號(hào)。寧波神經(jīng)元鈣成像nVoke
可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+熒光探針:與紫外光激發(fā)探針相比,可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+探針具有更強(qiáng)的染料吸收性能,對(duì)Ca2+變化水平檢測(cè)敏感度也更高,能夠降低對(duì)活細(xì)胞的光毒性和樣品自發(fā)熒光以及光散射的干擾,且無(wú)光譜偏移。較常使用的可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+熒光探針有Fluo-3,F(xiàn)luo-4,Rhod-2等,同時(shí)他們也都是非比率型指示劑。Fluo-3是較常用的可見(jiàn)光激發(fā)Ca2+熒光指示劑之一,是典型的的單波長(zhǎng)指示劑,比較大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。它與Ca2+結(jié)合之前幾乎無(wú)熒光,結(jié)合后熒光會(huì)增加60至100倍,從而避免了細(xì)胞自身的熒光干擾。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)為525~530nm(圖3)。Fluo-3可以用在激光共聚焦顯微成像或流式細(xì)胞儀中。它還有一個(gè)升級(jí)版本Fluo-4,在相同Ca2+濃度下信號(hào)更強(qiáng)。上海細(xì)胞鈣離子鈣成像動(dòng)物行為學(xué)功能鈣成像技術(shù)是將外源性熒光信號(hào)和生理現(xiàn)象耦合起來(lái),通過(guò)熒光染料信號(hào)的改變反映細(xì)。
隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展,神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號(hào)和生理現(xiàn)象耦合起來(lái)——通過(guò)熒光染料信號(hào)的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度,以此表示細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而判斷其功能活動(dòng)。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號(hào)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時(shí)間和空間上的傳遞穿梭。功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展使研究腦區(qū)和神經(jīng)元的內(nèi)部工作成為可能。
CaMPARI,一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術(shù),包含CaMPARI以及CaMPARI2(第二代)。其原理在于,CaMPARI蛋白在正常狀態(tài)下會(huì)發(fā)出綠色熒光,而如果對(duì)這種蛋白同時(shí)使用高濃度鈣離子與紫外光處理,它就會(huì)不可逆、長(zhǎng)久地轉(zhuǎn)變成另一種能發(fā)出紅色熒光的構(gòu)象,即實(shí)現(xiàn)將瞬間的神經(jīng)元活動(dòng)變成長(zhǎng)久的紅色熒光蛋白表達(dá)。研究人員通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將這種新型蛋白導(dǎo)入到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)中,然后用度的紫外光照射動(dòng)物的大腦,通過(guò)檢查熒光,找到發(fā)紅色熒光的神經(jīng)元,這些神經(jīng)元即是在紫外光照射期間活躍的神經(jīng)元。由于紫外光可以對(duì)著整個(gè)大腦進(jìn)行照射,所以理論上,人們可以對(duì)全腦進(jìn)行檢查。鈣離子成像可以用于感知覺(jué),學(xué)習(xí)記憶,社會(huì)性行為等各種各樣的研究中。
鈣離子成像技術(shù)(Calciumimaging)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測(cè)組織內(nèi)鈣離子濃度的方法,常用于神經(jīng)系統(tǒng)的研究,指示神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,提示神經(jīng)元活動(dòng)。其原理在于借助鈣離子濃度與神經(jīng)元活動(dòng)之間的嚴(yán)格對(duì)應(yīng)關(guān)系,利用特殊的熒光染料或者蛋白質(zhì)熒光探針(鈣離子指示劑,<spanlang=EN-US>Calciumindicator),將神經(jīng)元中鈣離子的濃度通過(guò)熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來(lái),并被顯微鏡捕捉,從而達(dá)到監(jiān)測(cè)神經(jīng)元活動(dòng)的目的。鈣離子在神經(jīng)元功能中起著重要的作用:它們作為細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)可觸發(fā)響應(yīng),如改變基因表達(dá)和突觸囊泡中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。由于細(xì)胞內(nèi)有離子泵在各種信號(hào)刺激下選擇性地運(yùn)輸這些離子,胞內(nèi)鈣濃度是高度動(dòng)態(tài)的。鈣成像利用鈣離子流的優(yōu)勢(shì),在活神經(jīng)細(xì)胞上直接可視化鈣信號(hào)。鈣成像技術(shù)的不斷進(jìn)步,使得人們對(duì)神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域有了進(jìn)一步的拓展。重慶神經(jīng)元鈣成像價(jià)格多少
鈣成像系統(tǒng)支持聯(lián)網(wǎng),基于網(wǎng)絡(luò)的軟件可讓您隨時(shí)隨地監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。寧波神經(jīng)元鈣成像nVoke
雙光子顯微成像技術(shù)是近些年發(fā)展起來(lái)的結(jié)合了共聚焦激光掃描顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新型非線(xiàn)性光學(xué)成像方法,采用長(zhǎng)波激發(fā),能對(duì)組織進(jìn)行深層次成像。常用的比較好激發(fā)波長(zhǎng)大多位于800-900nm,而水、血液和固有組織發(fā)色團(tuán)對(duì)這個(gè)波段的光吸收率低,此外散射的激發(fā)光子不能激發(fā)樣品,因此背景第,光損傷小,適用于在體檢測(cè)。雙光子熒光成像技術(shù)能準(zhǔn)確定位細(xì)胞內(nèi)置入的微電極位置,從而觀察胞體、樹(shù)突甚至單個(gè)樹(shù)突棘的活性。研究者可完整的觀察神經(jīng)組織的gaofen辨熒光圖像,甚至可以分辨神經(jīng)細(xì)胞單個(gè)樹(shù)突棘中的鈣分布。寧波神經(jīng)元鈣成像nVoke