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超微顯微鈣成像nVista3.0

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-10-10

解決鈣離子信號(hào)和BOLD信號(hào)轉(zhuǎn)換:功能核磁共振成像主要依賴于神經(jīng)元興奮后局部耗氧與血流振幅的不一致,通過測(cè)定血氧水平依賴性(BOLD)信號(hào)間接反映神經(jīng)元活動(dòng)。而鈣成像技術(shù)則是直接通過鈣離子濃度變化反映神經(jīng)元活動(dòng)。將這兩種技術(shù)聯(lián)用,需要考慮BOLD信號(hào)和鈣離子濃度變化之間的轉(zhuǎn)換。研究人員通過卷積函數(shù)比較好化的將鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)換為BOLD信號(hào),實(shí)現(xiàn)這兩者之間比較大的關(guān)聯(lián)。研究人員利用鈣離子指示劑工具小鼠發(fā)現(xiàn)在低頻刺激下(0.009–0.08赫茲),小鼠皮層鈣離子活動(dòng)變化與BOLD信號(hào)的一致性比較好。此外,鈣離子活動(dòng)變化與BOLD功能連接的關(guān)聯(lián)存在區(qū)域的依賴性:鈣離子和BOLD連接強(qiáng)度相關(guān)性在桶狀皮層與同側(cè)半球內(nèi)的腦區(qū)呈正相關(guān)關(guān)系(同步化),但與對(duì)側(cè)半球內(nèi)的腦區(qū)呈負(fù)相關(guān)。這種區(qū)域功能依賴性表明BOLD的連接來自于不同細(xì)胞群的協(xié)同神經(jīng)活動(dòng)。鈣離子成像可以追蹤神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢?。超微顯微鈣成像nVista3.0

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想要對(duì)鈣離子的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行有效的檢測(cè),鈣離子指示劑的選擇顯得尤為重要。鈣離子熒光指示劑在未結(jié)合鈣離子前幾乎無熒光,與鈣離子結(jié)合后,熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)。利用這一原理,可以通過指示劑的信號(hào)強(qiáng)弱來觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度水平的變化。根據(jù)激發(fā)光波長(zhǎng)范圍,鈣離子指示劑可以分為可見光激發(fā)和紫外光激發(fā),而根據(jù)其工作原理又可以分為比率和非比率型。常見的鈣離子指示劑有,紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針、可見光激發(fā)Ca2+熒光探針、轉(zhuǎn)基因Ca2+指示劑。重慶inscopix鈣成像代理鈣成像技術(shù)(calcium imaging)是指利用鈣離子指示劑或指示監(jiān)測(cè)組織內(nèi)鈣離子濃度的方法。

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單光子顯微技術(shù)是較成熟的熒光顯微技術(shù),但由于其使用的激發(fā)光波長(zhǎng)較短,成像深度有限;能量較大,會(huì)造成對(duì)熒光物質(zhì)的漂白,光毒性嚴(yán)重。激光共焦掃描顯微鏡由于共焦顯微鏡的孔徑很小,實(shí)現(xiàn)樣本三維成像要逐點(diǎn)掃描,成像速度慢,對(duì)樣本損害大,很難用于長(zhǎng)時(shí)間活細(xì)胞成像。而寬場(chǎng)顯微鏡能夠很好地實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)成像,光漂白小,因而較早應(yīng)用于活細(xì)胞內(nèi)的實(shí)時(shí)檢測(cè),但寬場(chǎng)顯微鏡由于離焦信號(hào)的干擾,難以實(shí)現(xiàn)多維成像。Derrick想重點(diǎn)介紹一下較為常用的觀察設(shè)備——雙光子熒光顯微鏡(Two-PhotonLaser-ScanningMicroscopy)。雙光子顯微成像技術(shù)是近些年發(fā)展起來的結(jié)合了共聚焦激光掃描顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新型非線性光學(xué)成像方法,采用長(zhǎng)波激發(fā),能對(duì)組織進(jìn)行深層次成像。常用的比較好激發(fā)波長(zhǎng)大多位于800-900nm,而水、血液和固有組織發(fā)色團(tuán)對(duì)這個(gè)波段的光吸收率低,此外散射的激發(fā)光子不能激發(fā)樣品,因此背景第,光損傷小,適用于在體檢測(cè)。雙光子熒光成像技術(shù)能準(zhǔn)確定位細(xì)胞內(nèi)置入的微電極位置,從而觀察胞體、樹突甚至單個(gè)樹突棘的活性。研究者可完整的觀察神經(jīng)組織的分辨熒光圖像,甚至可以分辨神經(jīng)細(xì)胞單個(gè)樹突棘中的鈣分布。

鈣是機(jī)體的組成元素之一。鈣離子作為電流載體維持細(xì)胞內(nèi)外的電化學(xué)梯度,同時(shí)在細(xì)胞的生命活動(dòng)中扮演著重要角色。作為第二信使,鈣參與細(xì)胞周期、細(xì)胞代謝、細(xì)胞分化、壞死、凋亡等等許多重要的生理過程。細(xì)胞內(nèi)的鈣離子水平通常很低,一般胞漿中的自由鈣約為100nM。胞內(nèi)的鈣可被各種亞細(xì)胞器所貯存,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道:其中約50%位于細(xì)胞核,30%位于線粒體,14%位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng),5%位于胞膜上,1%位于胞質(zhì)內(nèi),且因?yàn)殁}離子易與磷酸和碳酸復(fù)合物形成不溶物,故游離鈣只占[1]。細(xì)胞可以通過鈣內(nèi)流、內(nèi)鈣釋放及膜系統(tǒng)上的降鈣蛋白等一整套完整的監(jiān)控系統(tǒng)來維持細(xì)胞內(nèi)鈣的內(nèi)穩(wěn)狀態(tài)。例如與鈣內(nèi)流相關(guān)的通道例如電壓門控性鈣離子通道VDCC、受體活躍的通道RACC;與內(nèi)鈣釋放相關(guān)的受體如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的IP3受體;以及降鈣相關(guān)的脂膜及線粒體上的主動(dòng)運(yùn)輸?shù)拟}泵系統(tǒng)等等[2]。近20年來鈣的熒光成像及測(cè)定技術(shù)發(fā)展迅速,出現(xiàn)了各種各樣的鈣熒光指示劑,結(jié)合不斷發(fā)展的顯微成像系統(tǒng),我們可以對(duì)活細(xì)胞的鈣離子進(jìn)行測(cè)定及成像,進(jìn)一步揭示其生理機(jī)制及相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制。鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA,APTRA,BAPTA的衍生物,它們可以結(jié)合鈣離子從而顯示一個(gè)光譜響應(yīng)。鈣成像技術(shù)在神經(jīng)科學(xué)研究中的應(yīng)用。

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鈣成像是一種用于觀察和研究細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化的技術(shù)。鈣離子在細(xì)胞內(nèi)起著重要的調(diào)節(jié)作用,參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化等生物過程。鈣成像技術(shù)通過使用熒光探針或基因工程技術(shù)將熒光蛋白與鈣離子結(jié)合,使其能夠發(fā)出熒光信號(hào)。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度發(fā)生變化時(shí),熒光信號(hào)的強(qiáng)度也會(huì)相應(yīng)改變,從而可以通過顯微鏡觀察到鈣離子的動(dòng)態(tài)變化。鈣成像技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)等領(lǐng)域,有助于揭示鈣離子在生物過程中的作用機(jī)制。鈣成像數(shù)據(jù)采集盒擁有 2TB 存儲(chǔ)空間,可選擇以太網(wǎng)或 Wi? 方式連接電腦。江蘇熒光顯微鈣成像代理

通過鈣成像技術(shù)發(fā)現(xiàn)當(dāng)神經(jīng)元活動(dòng)的時(shí)候,胞內(nèi)鈣離子濃度能上升 10 - 100 倍。超微顯微鈣成像nVista3.0

隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展,神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號(hào)和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號(hào)的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度,以此表示細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而判斷其功能活動(dòng)。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號(hào)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時(shí)間和空間上的傳遞穿梭。功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展使研究腦區(qū)和神經(jīng)元的內(nèi)部工作成為可能。超微顯微鈣成像nVista3.0