向電極連續(xù)施加1mV、10~50ms的階躍脈沖,電極入水后電阻約為4~6mΩ。此時(shí),在計(jì)算機(jī)屏幕顯示框中可以看到測試脈沖產(chǎn)生的電流波形。剛開始的時(shí)候增益不要設(shè)置太高,一般可以是1~5mV/PA,避免放大器飽和。由于細(xì)胞外液和電極液離子組成的差異導(dǎo)致液體接界電位,電極剛?cè)胨畷r(shí)測試波形的基線不在零線上。因此,需要將保持電壓設(shè)置為0mV,并調(diào)整“電極不平衡控制”,使電極DC電流接近于零。當(dāng)使用微操作器使電極靠近細(xì)胞時(shí),當(dāng)電極前緣接觸細(xì)胞膜時(shí),密封電阻指標(biāo)Rm會上升,當(dāng)電極輕微下壓時(shí),Rm指標(biāo)會進(jìn)一步上升。當(dāng)通過細(xì)塑料管對電極施加輕微負(fù)壓,且細(xì)胞膜特性良好時(shí),Rm一般會在1min內(nèi)迅速上升,直至形成Gω級高阻密封。一般在Rm達(dá)到100MΩ左右時(shí),在電極前端施加一個(gè)輕微的負(fù)電壓(-30~-30~-10mV),有利于gω密封的形成。此時(shí)的現(xiàn)象是電流波形再次變平,使電極從-40到-90mV超極化,有助于加速形成密封。為了確認(rèn)gωseal的形成,可以提高放大器的增益,因此可以觀察到除了脈沖電壓開始和結(jié)束時(shí)的容性脈沖超前電流外,電流波形仍然是平坦的。膜片鉗,為您的科研之路增添一雙慧眼!德國雙電極膜片鉗電壓鉗制
全細(xì)胞膜片鉗記錄(Whole-cellpatch-clamprecording)是一種早期且使用頻繁的鉗夾技術(shù),相當(dāng)于連續(xù)單電極電壓鉗夾記錄,也就是說,全細(xì)胞記錄類似于傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄,但具有更大的優(yōu)勢,如分辨率高、噪聲低、穩(wěn)定性好、細(xì)胞內(nèi)成分可控等。全細(xì)胞記錄技術(shù)測量一個(gè)細(xì)胞內(nèi)所有通道的電流,記錄過程中電極的溶液代替原生質(zhì)的成分。雖然膜片鉗記錄技術(shù)相對于原來的單電極電壓鉗有了很大的進(jìn)步,尤其是在單離子通道鉗記錄中,細(xì)胞或腦片的組織選擇和實(shí)驗(yàn)溶液的制備仍然是非常重要的步驟。德國腦片膜片鉗系統(tǒng)膜片鉗技術(shù),讓離子通道研究變得更加準(zhǔn)確與高效!
現(xiàn)在這塊全新的芯片被放置在了跟前置放大器大小類似的小盒子中,便成就了這款全球較小的膜片鉗放大器ePatch。體積大幅縮減只是一個(gè)表面,由于細(xì)胞電信號在被電極記錄到后,直接進(jìn)入了芯片,以較短的路徑直接從模擬信號轉(zhuǎn)變成了數(shù)字信號,在很大程度上減少了環(huán)境及電路噪音對信號的影響,所以這款放大器便可以輕易獲取非常高質(zhì)量且穩(wěn)定的電生理信號。ePatch體積只為42*18*78mm,重量200g,整套設(shè)備的大小只相當(dāng)于傳統(tǒng)膜片鉗設(shè)備的前置放大器,可以輕松地放入衣服口袋。用USB接口連接電腦后即可使用,無需額外電源,連接和使用都極為簡便。沒有了占地方的放大器,數(shù)模轉(zhuǎn)換器以及相互連接的眾多電線,電源線等等,我們的膜片鉗又進(jìn)一步減小了體積。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*62小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.
膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細(xì)胞膜電流及離子通道的蕞重要的技術(shù)。從技術(shù)層面來解釋的話,膜片鉗技術(shù)(patchclamp)是指利用鉗制電壓或者電流的方法(通常為鉗制電壓)來記錄細(xì)胞膜離子通道電活動的微電極技術(shù)。膜片鉗技術(shù)的原理為:使用一個(gè)一頭尖一頭粗的錐狀玻璃管,管中設(shè)有微電極,管的前列直徑約1.5~3.0μm,通過負(fù)壓吸引使前列口與細(xì)胞膜形成千兆歐姆級的阻抗封接,前列口內(nèi)的細(xì)胞膜區(qū)域與周圍其他區(qū)域形成了電學(xué)分隔,然后人工鉗制此片區(qū)域細(xì)胞膜的電位,即可達(dá)到對膜片上離子通道電流的監(jiān)測與記錄。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成。
膜片鉗技術(shù)的創(chuàng)立取代了電壓鉗技術(shù),是細(xì)胞電生理研究的一個(gè)飛躍,使得離子通道的研究,從宏觀深入到微觀,使昔日的“肉湯生理學(xué)(brothphysiology)”與“閃電生理學(xué)(lightningphysiology)”在分子水平上結(jié)合起來,使人們對膜通道的認(rèn)識耳目一新。當(dāng)前,生理學(xué)、生物物理學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)和藥理學(xué)等多種學(xué)科正在把膜片鉗技術(shù)和膜通道蛋白重組技術(shù)、同位素示蹤技術(shù)和光譜技術(shù)等非電生理技術(shù)結(jié)合起來,協(xié)同對離子通道進(jìn)行較全的研究。不少實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)將基因工程與膜片鉗技術(shù)結(jié)合起來,把通道蛋白有目的地重組于人工膜中進(jìn)行研究。設(shè)想將合成的通道蛋白分子接種入機(jī)體以替換有缺陷和異常的通道的功能而達(dá)到的目的。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*53小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細(xì)玻璃管拉制成的。德國可升級膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作
離子通道的近代觀念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世紀(jì)30—50年代的開創(chuàng)性研究。德國雙電極膜片鉗電壓鉗制
資料分析:一般電學(xué)性質(zhì)∶通過I/V關(guān)系計(jì)算得到單通道電導(dǎo),觀察通道有無整流。通過離子選擇性、翻轉(zhuǎn)電位或其它通道的條件初步確定通道類型。通道動力學(xué)分析∶開放時(shí)間、開放概率、關(guān)閉時(shí)間、通道的時(shí)間依賴性失活、開放與關(guān)閉類型(簇狀猝發(fā),Burst)樣開放與閃動樣短暫關(guān)閉(flickering),化學(xué)門控性通道的開、關(guān)速率常數(shù)等數(shù)據(jù)。藥理學(xué)研究∶研究的藥物,阻斷劑、激動劑或其它調(diào)制因素對通道活動的影響情況。綜合分析得出結(jié)淪。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*26小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.德國雙電極膜片鉗電壓鉗制