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流式細(xì)胞術(shù)為一種生物學(xué)技術(shù),計(jì)數(shù)和分選懸浮于流體中的微小顆粒是它的主要用途。這種技術(shù)能夠用來(lái)連續(xù)的多參數(shù)的分析流過(guò)光學(xué)或電子檢測(cè)器的一個(gè)個(gè)細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytoMetry,F(xiàn)CM)是通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記的熒光信號(hào)使高速、逐一的定量分析和分選懸液中的單細(xì)胞或其他生物粒子得以實(shí)現(xiàn)的技術(shù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則有哪些呢?將紅細(xì)胞去除的方法:紅細(xì)胞裂解法,有著簡(jiǎn)單的操作,比較快的速度,并且使原始標(biāo)本的白細(xì)胞分布盡可能保持。建議在染色后溶血。若需要在染色前溶血,則應(yīng)當(dāng)確保:溶血過(guò)程中不能改變抗原性。徹底洗去溶血?jiǎng)?,沒(méi)有影響到細(xì)胞和抗體結(jié)合的動(dòng)力反應(yīng)。固定劑不包含在所用的溶血?jiǎng)┲?,不然?huì)對(duì)細(xì)胞活性及表面標(biāo)記結(jié)果產(chǎn)生影響。密度梯度離心法,能夠比較好的回收靶細(xì)胞,并且可能得到富集,同時(shí)將紅細(xì)胞、碎片等去除。細(xì)胞分析儀可檢測(cè)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)軌跡以及在不同環(huán)境下的反應(yīng)情況,為研究細(xì)胞動(dòng)態(tài)提供數(shù)據(jù)支持。南京BioTek酶標(biāo)儀批發(fā)
流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞時(shí),可以從一個(gè)細(xì)胞中同時(shí)獲得多種細(xì)胞信息。由于流式細(xì)胞儀采用的光源不斷改進(jìn)從開(kāi)始的單一的激光器或紫外光器,至目前發(fā)展為采用2-3個(gè)激光器,或再加一個(gè)紫外光器。有的采用立體空間激光系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)多熒光道分析,Zda程度地減少熒光信號(hào)之間的補(bǔ)償,提高檢測(cè)的靈敏度,所以,利用空間立體激發(fā)的多激光系統(tǒng)可以提高多參數(shù)的分析質(zhì)量。目前的單激光四色分析或雙激光四色分析的流式細(xì)胞儀,488nm激光器激發(fā)出的4種不同熒光光譜之間常有重疊,做4色分析時(shí),難以避免熒光過(guò)多重疊而導(dǎo)致的補(bǔ)償困難。利用該系統(tǒng)對(duì)488nm激光產(chǎn)生的3色熒光與635nm激發(fā)而產(chǎn)生的第4種熒光分成兩種信號(hào),能Zda程度地減少補(bǔ)償,使4色熒光達(dá)到Zwan美的效果。無(wú)錫Agilent流式細(xì)胞儀批發(fā)細(xì)胞分析儀是一種高度自動(dòng)化、快速檢測(cè)、精確測(cè)量和分析細(xì)胞的儀器。
CytoFLEXSRT是一款能夠滿(mǎn)足日常普遍分選需求的桌面型流式分選儀。CytoFLEXSRT細(xì)胞分選儀繼承了CytoFELX小巧,智能的優(yōu)越特性,同時(shí)擁有優(yōu)良的性能與簡(jiǎn)單的操作,用科技與創(chuàng)新,將分選化繁為簡(jiǎn),使得分選更加輕松與準(zhǔn)確,讓科研工作者更加專(zhuān)注于科學(xué)研究本身。通過(guò)分選校準(zhǔn),系統(tǒng)獲得好的液滴斷點(diǎn)、好的側(cè)液流設(shè)置并自動(dòng)生成液滴延遲值(自動(dòng)液滴延遲)。當(dāng)軟件檢測(cè)到液流不穩(wěn)定且在1分鐘內(nèi)無(wú)法通過(guò)自動(dòng)保持功能恢復(fù),啟動(dòng)自動(dòng)恢復(fù)功能。
一般來(lái)說(shuō),在進(jìn)行較大或者脆弱細(xì)胞的分選時(shí),為了得到Z佳結(jié)果,應(yīng)該使用較大的噴嘴和較低的壓力;在分選較小或者非脆弱細(xì)胞時(shí),如果要增加產(chǎn)量,應(yīng)該使用較小的噴嘴和較高的壓力。細(xì)胞分析儀可以對(duì)不同的單細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測(cè),而且在確保細(xì)胞數(shù)量足夠的前提下,可以在短時(shí)間內(nèi)獲取大量的細(xì)胞,可以同時(shí)檢測(cè)數(shù)百萬(wàn)的細(xì)胞。細(xì)胞分析儀可以對(duì)單個(gè)細(xì)胞的多種特征進(jìn)行分析,對(duì)單個(gè)細(xì)胞的不同的參數(shù)進(jìn)行分析,借助熒光染色的方式對(duì)單細(xì)胞受體的表達(dá)方式和DNA的含量等進(jìn)行分析,實(shí)現(xiàn)了定量分析和定性分析的結(jié)合。細(xì)胞分析儀可以通過(guò)化學(xué)反應(yīng)、節(jié)段反應(yīng)技術(shù)等獲取細(xì)胞的生化信息。
細(xì)胞分析儀性能的技術(shù)指標(biāo)主要有熒光分辨率、熒光靈敏度、分析參數(shù)多少及分析、分選速度及純度等。熒光分辨率是指分辨兩個(gè)相鄰峰的Z小距離,通常用變異系數(shù)(CV值)來(lái)表示?,F(xiàn)在市場(chǎng)上主流型號(hào)的熒光分辨率小于2.0%,有的甚至在1%之內(nèi)。熒光靈敏度反映了儀器探測(cè)Z小熒光光強(qiáng)的能力,一般用熒光微球上可測(cè)出的熒光(FITC)的Z小分子數(shù)來(lái)表示。目前細(xì)胞分析儀可以達(dá)到100以?xún)?nèi)。一般分析速度為500-10000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度控制在1000個(gè)細(xì)胞/s以下,分選純度>98%,有的細(xì)胞分析儀分析速度可達(dá)100000個(gè)細(xì)胞/s,分選速度可達(dá)70000個(gè)細(xì)胞/s,分選純度>98%。細(xì)胞分析儀可提供多軸或多屏幕操作,并可同時(shí)、實(shí)時(shí)地看到不同樣品的結(jié)果。無(wú)錫Agilent流式細(xì)胞儀批發(fā)
細(xì)胞分析儀可以與流式細(xì)胞儀、顯微鏡等儀器聯(lián)動(dòng)使用,可擴(kuò)展多種功能。南京BioTek酶標(biāo)儀批發(fā)
流式細(xì)胞儀是常用的細(xì)胞分析、分選的儀器,可以對(duì)處于液流中的各種熒光標(biāo)記的微粒進(jìn)行多參數(shù)、快速、準(zhǔn)確的定性、定量測(cè)定。流式細(xì)胞儀選購(gòu)方法是什么?明確目的:在購(gòu)買(mǎi)流式細(xì)胞儀之前要考慮清楚自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,流式?xì)胞儀并不是wan能的,比如說(shuō)如果想要檢測(cè)亞微分辨率的微粒,一般的流式細(xì)胞儀就都不合適。就熒光檢測(cè)而言,經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的新型流式細(xì)胞儀在分辨模糊昏暗的細(xì)胞群體方面,不如那些貴一點(diǎn)的流式細(xì)胞儀,假如需要研究分析磷酸化受體和未磷酸化受體的話(huà),可能就要重新考慮流式細(xì)胞儀的選擇了。南京BioTek酶標(biāo)儀批發(fā)
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