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來源: 發(fā)布時間:2024-09-04

    只斷裂賴氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***過程的羧基參胰蛋白酶降解物分析與形成的肽鍵。白色或米黃色結晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**適pH值~。pH>。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**劑對其活性有強烈**。臨床用于抗消腫,工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。胰蛋白酶*典標準胰蛋白酶來源含量本品系自豬、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。胰蛋白酶制法要求本品應從檢*合格的牛、羊或豬胰中提取,生產(chǎn)過程應符合現(xiàn)行版《*品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。胰蛋白酶性狀本品為白色或類白色結晶性粉末。胰蛋白酶鑒別取本品約2mg,置白色點滴板上,加對甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽試液,即顯紫色。胰蛋白酶檢查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法測定(2010年版*典二部附錄ⅥH),pH值應為~。溶液的澄清度取本品,加,依法檢查(2010年版*典二部附錄ⅨB),溶液應澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制備取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸鹽緩沖液(取,混合,pH值為)50ml,溫熱使溶解,冷卻后再稀釋至刻度,搖勻。細胞培養(yǎng)中胰酶的作用一般是分解脂肪等。新疆進口胰酶牌子

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胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在pH為8.0、溫度為37°℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。遼寧重組胰酶價格胰酶和胰蛋白酶不一樣,前者包括后者。

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在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細胞間的蛋白質(zhì),破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關,在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細胞或?qū)σ让该舾械募毎2捎玫蜐舛龋?.05%)的胰酶進行細胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細胞連接促進細胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。

胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶(Trypsin)、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2+和Mg2+。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點,通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。使用說明:貼壁細胞的消化:1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細胞消化液(含酚紅),略蓋過細胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來;此時吸除胰酶細胞消化液;加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換。

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    6.磷酸酶EDTA相對不溶??梢杂么帕嚢杵鲾嚢?,或?qū)⑵渲糜?度的冰箱中,溶解后過濾并**。7.可配備2-3倍血漿酶,節(jié)省時間和過濾器。使用時,請對PBS消毒。8.將儲存溶液儲存在-20°C的冰箱中,然后將溶液儲存在4°C。使用時,請勿將其放在27°C的水浴中,因為這會使自由基酶迅速無法使用。使用前放置一次。是的,因為添加的數(shù)量很少,因此通常不會凍結細胞。9.在消化過程中,向培養(yǎng)瓶中加入適量的胰酶。個人經(jīng)驗,一般在10cm培養(yǎng)皿中加。加入后,立即搖動培養(yǎng)皿蓋住胰酶。一旦充滿,用負壓吸引多余的胰酶排出,將其加入37度培養(yǎng)箱中進行消化。10.請注意,過量的胰酶對細胞有害,而過量的EDTA也會影響粘附,因此無需將細胞浸入血漿酶中進行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用,并具有在37度以下消化的能力。在消化過程中,甚至不需要將一些易于消化的細胞放入培養(yǎng)箱中。請注意,它不能消化太長時間。四、實驗所需試劑清單:序列產(chǎn)品名貨號CAS備注11000ul藍吸頭FT-10002氫氧化鈉JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合樹脂chelex100SS6072以上為EDTA-胰蛋白酶的配制,實驗請選用高質(zhì)量試劑。培養(yǎng)細胞時,胰酶和雙抗該怎么用?甘肅進口胰酶一般多少錢

適用于貼壁細胞的消化傳代;也可用于組織細胞分離的初步消化。新疆進口胰酶牌子

品名:0.25%胰蛋白酶溶液,1X分類:細胞消化試劑規(guī)格:100ML用途:消化試劑,如胰蛋白酶,被用于將粘附細胞從其附著的表面或底物上分離和降解,以及將組織進行游離,以開展原代細胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶(1:250)以及一種新型非哺乳動物豬胰蛋白酶替代品,稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液,可以快速消化,同時不損傷細胞。其非哺乳動物配方使它適用于無血清應用,不需要失效或?qū)γ敢种苿4嗽噭┛墒辜毎豢焖俜蛛x,形成單細胞懸浮物,保持高細胞活力,并使傳代時的變異減至**小。新疆進口胰酶牌子