胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在pH為8.0、溫度為37°℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。胰蛋白酶是一種胰絲氨酸肽鏈內切酶,作用于多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側。河南EDTA胰酶采購
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細胞的提取、培養(yǎng),以及體外細胞培養(yǎng)過程中,均會使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細胞間蛋白質,使組織或細胞離散成單個細胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細胞間連接蛋白的水解,起到增強消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時呈紫紅色,偏酸性時呈橘紅色,近中性時呈粉紅色。本產品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無酚紅指示劑,經0.22μm過濾除菌。河南EDTA胰酶采購消化同種細胞時含EDTA的胰酶消化時間會比不含EDTA時間短。
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎?能,對于胰酶呈黃色的問題,不同品牌也都對此現(xiàn)象進行了測試實驗。變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離,請放心使用。細胞消化時,胰酶不去除對細胞的影響?細胞消化時,如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA,比較好去除。EDTA是一種化學螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細胞分離。但EDTA不能被血清中和,消化后要徹底清洗去除,否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,所以常二者合用。胰酶的保存
胰蛋白酶**點評胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀,易于引流排痰,加速創(chuàng)面愈合凈化,促進肉芽**增生,而不損傷正常**,臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的**或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在pH為、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶**劑終止胰酶對細胞的作用。1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為%,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調PH到左右)或PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻,置于4℃內過夜。2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器(微米微孔濾膜)抽濾**。3.分裝成小瓶于-20℃保存以備使用可!詞條圖冊更多圖冊參考資料1.胰蛋白酶.化學品數(shù)據(jù)庫[引用日期2017-05-26].***典**會,***典2010版[M],北京:**醫(yī)*科技出版社。消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的?
在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切段,水解細胞間的蛋白質,破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關,在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細胞或對胰酶敏感的細胞常采用低濃度(0.05%)的胰酶進行細胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細胞連接促進細胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。胰酶細胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA。胰酶進口
胰酶在PH值7.2-8.0的時候,溶液呈淡紅色。河南EDTA胰酶采購
0.25%胰酶是細胞生物學中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。
胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。
胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。胰酶使用的時候要注意什么?(1)在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。(2)胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。 河南EDTA胰酶采購