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Enterokinase,Recombinant,ExpressedinE.coli大腸桿菌表達(dá)重組腸激酶(不帶標(biāo)簽)注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品所講述的緩沖體系需要自行配置。2.不建議37℃條件下酶切,可能會(huì)有非特異性酶切出現(xiàn)。3.在>200mM咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切會(huì)受到影響。如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種,為獲得理想的酶切結(jié)果,請(qǐng)先將樣品透析到25mMTris-HCl8.0緩沖液中,然后再進(jìn)行酶切實(shí)驗(yàn);若不方便透析,可將樣品稀釋到咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切,酶的用量與蛋白比例不變;若干擾因素很多,且不便去除,需要適當(dāng)增加酶量或延長(zhǎng)酶切時(shí)間,有助于得到理想的酶切效果。4.磷酸鹽對(duì)Enterokinase有很強(qiáng)的抑制作用,痕量的磷酸鹽都會(huì)嚴(yán)重影響Enterokinase的活性,因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽。5.本品是具有高酶活力重組腸激酶,切割蛋白使用量少,可不考慮除去。后續(xù)如需去除重組腸激酶,可用陰離子交換樹(shù)脂(如DEAE-FF)對(duì)其進(jìn)行洗脫。推薦洗脫條件如下:平衡緩沖液:25mMTris-HClpH8.0洗脫緩沖液:25mMTris-HClpH8.0,含100mMNaCl6.蛋白酶切效果不好,可適當(dāng)增加酶量,或適當(dāng)延長(zhǎng)酶切時(shí)間。α-凝血酶是研究血液凝固機(jī)制和血栓性疾病發(fā)展的主要靶點(diǎn)。重組α-凝血酶用于體外測(cè)定。Recombinant Human LAMP5 Protein,His Tag
N-糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過(guò)95%的碳水化合物所需要的酶量。儲(chǔ)存條件-15~-25℃保存,有效期1年。使用說(shuō)明變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,冰上冷卻,離心10秒;3)加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,總反應(yīng)體積20μL;4)加入0.2~0.5μL的PNGase,輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL。2)加入0.5~1μL的PNGaseF,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長(zhǎng)孵育時(shí)間。Recombinant Mouse CD40/TNFRSF5 Protein,His TagPNGase F可以用于從糖蛋白上釋放完整的N-連接寡糖鏈,這在蛋白質(zhì)組學(xué)和糖生物學(xué)研究中非常有用。
SARS-CoV-2,whichcausestheglobalpandemiccoronavirusdisease2019(Covid-19),belongstoafamilyofvirusesknownascoronaviruses.TheSARS-CoV-2Sproteinisaglycoproteinthatmediatesmembranefusionandviralentry.TheRBDofSARS-CoV-2bindsametallopeptidase,angiotensin-convertingenzyme2(ACE-2).SeveralemergingSARS-CoV-2genomeshavebeenidentifiedincludingtheOmicron,orB.1.1.529,variant.FirstidentifiedinNovember2021inSouthAfrica,theOmicronvariantquicklybecamethepredominantSARS-CoV-2variantandisconsideredavariantofconcern(VOC).TheOmicronvariantcontains15mutationsinRBDdomainthatpotentiallyaffectviralfitnessandtransmissibility.ThemajorityofthemutationsareinvolvedinACE-2bindingandOmicronbindsACE-2withgreateraffinity,potentiallyexplainingitsincreasedtransmissibility.Severalofthesemutationsarealsoidentifiedinfacilitatingimmuneescapeandreducingneutralizationactivitytoseveralmonoclonalantibodies.
糖生物學(xué)中的應(yīng)用糖基化分析Endo H常用于分析蛋白質(zhì)的糖基化狀態(tài)。通過(guò)Endo H處理,可以將蛋白質(zhì)上的高甘露糖型糖鏈去除,從而簡(jiǎn)化糖鏈結(jié)構(gòu),便于進(jìn)一步分析。蛋白質(zhì)功能研究Endo H可用于研究糖基化對(duì)蛋白質(zhì)功能的影響。通過(guò)比較Endo H處理前后蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性,可以揭示糖基化在蛋白質(zhì)功能中的作用。藥物開(kāi)發(fā)某些藥物的療效和藥代動(dòng)力學(xué)特性受其糖基化狀態(tài)影響。Endo H可用于研究藥物分子的糖基化修飾,為藥物設(shè)計(jì)提供重要信息。疾病診斷異常的蛋白質(zhì)糖基化與多種疾病相關(guān)。Endo H可用于檢測(cè)疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的糖基化改變,為疾病診斷提供新的思路。結(jié)論Endo H作為一種重要的工具酶,在糖生物學(xué)研究中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。深入理解Endo H的結(jié)構(gòu)與功能,將有助于揭示蛋白質(zhì)糖基化在生命過(guò)程中的作用,為相關(guān)疾病的診斷提供新策略。透明質(zhì)酸及其衍生物由于其生物相容性和生物降解性,被用作藥物的控釋載體。
糖苷內(nèi)切酶H是一種重組糖苷酶,能夠?qū)-糖蛋白中的高甘露糖和某些雜合型寡聚糖的殼二糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行切割,去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖。糖苷內(nèi)切酶H克隆自褶皺鏈霉菌(Streptomycesplicatus)。并在酵母中重組表達(dá)。本產(chǎn)品帶his標(biāo)簽,常應(yīng)用于抗體及其相關(guān)蛋白完全去糖基化。另外,我司還提供其他類型的糖苷酶,包括糖苷內(nèi)切酶S(Cat#20413ES),酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F(比活性:750000U/mL),酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F(比活性:100000U/mL)。儲(chǔ)存條件-15~-25℃保存,有效期1年。使用說(shuō)明變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,冰上冷卻,離心10秒;3)加入2μL的Buffer2,8μL去離子水,總反應(yīng)體積20μL;4)加入1-2μL的EndoH,輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。5)65℃下熱失活10分鐘。非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至終體積為20μL。2)加入2~5μL的EndoH,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加EndoH的量和延長(zhǎng)孵育時(shí)間。全長(zhǎng)跨膜蛋白CB1它通過(guò)與G蛋白的相互作用,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的第二信使系統(tǒng),如cAMP水平。Recombinant Mouse CD40/TNFRSF5 Protein,His Tag
腸激酶作為研究工具,用于探索蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系,以及在蛋白質(zhì)工程中進(jìn)行蛋白質(zhì)的定點(diǎn)突變。Recombinant Human LAMP5 Protein,His Tag
Endo H糖苷內(nèi)切酶H:結(jié)構(gòu)、功能及其在糖生物學(xué)中的應(yīng)用摘要Endo H糖苷內(nèi)切酶H(Endo H)是一種專門(mén)切割N-連接糖鏈的內(nèi)切酶,用于糖生物學(xué)和蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域。本文將探討Endo H的結(jié)構(gòu)特性、催化機(jī)制、以及其在研究和臨床應(yīng)用中的潛力。引言N-連接糖基化是一種在真核細(xì)胞中普遍存在的蛋白質(zhì)修飾方式,涉及將糖鏈添加到蛋白質(zhì)的天冬酰胺殘基上。Endo H作為一種內(nèi)切酶,能夠特異性地識(shí)別并切割N-連接糖鏈中的β-N-乙酰葡糖胺苷鍵,從而在蛋白質(zhì)工程和生物制藥中發(fā)揮重要作用。Endo H的結(jié)構(gòu)特性Endo H通常來(lái)源于流感嗜血桿菌(Hemophilus influenzae),其分子質(zhì)量約為50 kDa。該酶由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成:一個(gè)負(fù)責(zé)識(shí)別糖鏈的催化結(jié)構(gòu)域和一個(gè)有助于酶穩(wěn)定性的非催化結(jié)構(gòu)域。催化機(jī)制Endo H的催化機(jī)制涉及對(duì)N-連接糖鏈的特異性識(shí)別和切割。酶的活性位點(diǎn)含有多個(gè)氨基酸殘基,這些殘基與糖鏈的特定結(jié)構(gòu)相互作用,導(dǎo)致酶對(duì)底物的高特異性。Endo H催化的糖苷鍵斷裂是一水解反應(yīng),需要水分子的參與。Recombinant Human LAMP5 Protein,His Tag