抑肽酶(Aprotinin),一種絲氨酸蛋白酶抑制劑,廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。本研究探討了利用大腸桿菌(E. coli)表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組抑肽酶的方法,及其在科研和工業(yè)生產(chǎn)中的優(yōu)勢。引言抑肽酶,又稱胰蛋白酶抑制劑,是一種小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的活性。在生物制藥、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)研究中,抑肽酶的使用對于防止非特異性蛋白水解至關(guān)重要。傳統(tǒng)的抑肽酶主要來源于動物,如牛肺,但存在外源病毒污染的風(fēng)險。因此,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組抑肽酶的生產(chǎn),可以提供一種無動物源、高純度、質(zhì)量穩(wěn)定的替代品。材料與方法基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建:人源Ⅲ型膠原蛋白基因被克隆并構(gòu)建到適合大腸桿菌表達(dá)的質(zhì)粒載體中。大腸桿菌表達(dá)菌株的構(gòu)建:通過轉(zhuǎn)化,將構(gòu)建好的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌宿主菌中,構(gòu)建表達(dá)菌株。發(fā)酵培養(yǎng):利用發(fā)酵罐進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng),以提升重組抑肽酶的產(chǎn)量。蛋白純化:通過多次柱純化獲得高純度的重組抑肽酶。常用的跨膜蛋白表達(dá)系統(tǒng)包括大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)等。Recombinant Human MCP-4/CCL13
N-糖苷酶F(PNGaseF)是一種酰胺水解酶,經(jīng)過和平空間站伊麗莎菌克隆,主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。酵母重組表達(dá)N-糖苷酶F(比活性:750000U/mL),可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。PNGaseF的切割位點為糖蛋白內(nèi)側(cè)N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵,同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸。本產(chǎn)品帶his標(biāo)簽,常應(yīng)用于抗體及其相關(guān)蛋白完全去糖基化。另外,我司還提供其他類型的糖苷酶,包括酵母重組表達(dá)的N-糖苷酶F,糖苷內(nèi)切酶H,糖苷內(nèi)切酶S。產(chǎn)品信息產(chǎn)品性質(zhì)中文別名(Chinesesynonym)N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶F英文別名(Englishsynonym)PNGaseF來源(Source)酵母重組表達(dá)分子量(Molecularweight)36kDa比活性(Specificactivity)750000U/mL緩沖液組分(Buffer)20mMTris-HClpH7.5,50mMNaCl,5mMEDTA,50%GlycerolRecombinant Human PBK/TOPK Protein,His Tag泛素-蛋白酶體途徑在調(diào)控多種細(xì)胞過程中的關(guān)鍵作用,靶向這一途徑的藥物開發(fā)已成為預(yù)防某些疾病的新策略。
抑肽酶(Aprotinin),又稱為抑蛋白酶肽,是一種競爭性、可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑,可與絲氨酸蛋白酶形成穩(wěn)定復(fù)合物并阻斷酶的活性位點,這種結(jié)合是可逆的,大多數(shù)的抑肽酶-蛋白酶復(fù)合物在極端的pH<3.0的條件下解除結(jié)合。抑肽酶抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶、激肽釋放酶和血纖維蛋白溶酶,不能抑制Xa因子和凝血酶。從結(jié)構(gòu)上來說,抑肽酶是一種來自牛肺的單體球狀蛋白,由58個氨基酸組成并排列在具有三個交聯(lián)二硫鍵的單個多肽鏈中。重組抑肽酶采用大腸桿菌表達(dá),在GMP法規(guī)下生產(chǎn),不含任何動物源成分,無動物源性的病毒污染,氨基酸序列與來源于牛肺的抑肽酶完全一致,具有與動物源性抑肽酶相同的酶學(xué)性質(zhì),可替代動物源性抑肽酶用于各種生物技術(shù)過程中,如:重組蛋白生產(chǎn)中抑制絲氨酸蛋白酶的活性;細(xì)胞培養(yǎng)等。
Dabigatranetexilatemesylate,又稱甲磺酸達(dá)比加群酯,是可口服的凝血酶抑制劑,是一種抗凝藥,通過競爭結(jié)合凝血酶的纖維蛋白特異結(jié)合位點,阻礙纖維蛋白生成,從而抑制血栓的形成。產(chǎn)品信息英文別名(EnglishSynonym)Dabigatranetexilatemesylate,Pradaxa,BIBR1048MS,Dabigatranetexilatemethanesulfonate中文名稱(ChineseName)甲磺酸達(dá)比加群酯,達(dá)比加群酯甲磺酸鹽靶點(Target)Thrombin通路(Pathway)Protease/MetabolicEnzyme--ThrombinCAS號(CASNO.)872728-81-9分子式(Formula)C35H45N7O8S分子量(MolecularWeight)723.84外觀(Appearance)粉末純度(Purity)≥98%溶解性(Solubility)溶于DMSO運輸和保存方法-25~-15℃保存,有效期3年。使用方法【數(shù)據(jù)來自于公開發(fā)表的文獻(xiàn),供參考,具體使用濃度請參考相關(guān)文獻(xiàn),并根據(jù)自身實驗條件(如實驗?zāi)康?,?xì)胞種類,培養(yǎng)特性等)進(jìn)行摸索和優(yōu)化?!縿游飳嶒灒w內(nèi)實驗)在體內(nèi),口服dabigatranetexilate在大10-50mg/kg)和恒河猴(1-5mg/kg)時間劑量依賴性地表現(xiàn)出抗凝效果。跨膜蛋白在宿主細(xì)胞中的表達(dá)水平通常有點低,研發(fā)困難,對蛋白表達(dá)生產(chǎn)平臺技術(shù)要求極高。
Cas9核酸酶是一種引導(dǎo)RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶,可以催化雙鏈DNA的裂解。這種靶向核酸酶是一種高精度的基因組編輯的有力工具。Cas9蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA(gRNA)成分形成一個非常穩(wěn)定的核糖白(RNP)復(fù)合物。Cas9RNP復(fù)合物可以在進(jìn)入細(xì)胞后,通過添加一個N端核定位信號(NLS),增加入核效率。YEASEN開發(fā)的NLS-Cas9核酸酶在蛋白的N端包含一個核定位序列(NLS),以增加入核切割效率。產(chǎn)品特點如下:無DNA:沒有外部DNA添加。安全性好:野生型Cas9蛋白,無標(biāo)簽??蓱?yīng)用于:通過體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。產(chǎn)品信息貨號11366ES60/11366ES76規(guī)格100μg/500μg來源重組Cas9來源于大腸桿菌物種化膿性鏈球菌標(biāo)簽無分子量160KDa濃度10mg/mL(50μg);10mg/mL(100μg)透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid,簡稱HA)是一種存在于人體和動物組織中的天然高分子多糖,稱為糖醛酸或玻尿酸。Recombinant Human EG-VEGF
α-凝血酶是研究血液凝固機(jī)制和血栓性疾病發(fā)展的主要靶點。重組α-凝血酶用于體外測定。Recombinant Human MCP-4/CCL13
產(chǎn)品描述纖維蛋白原(Fibrinogen,F(xiàn)g),即凝血因子I,分子量約340kDa,由α、β、γ三對不同多肽鏈組成,多肽鏈間以二硫鍵相連。α鏈分子量63.5kDa,β鏈分子量56kDa,γ鏈分子量47kDa,纖維蛋白原約含4%碳水化合物。纖維蛋白原參與凝血的原理:在凝血酶作用下,α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽,生成纖維蛋白單體。在此過程中,由于釋放了酸性多肽,負(fù)電性降低,單體易于聚合成纖維蛋白多聚體,但此時單體之間借氫鍵與疏水鍵相連,尚可溶于稀酸和尿素溶液中。進(jìn)一步在Ca2+與活化的ⅩⅢ因子作用下,單體之間以共價鍵相連,則變成穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白凝塊,完成凝血過程。來源于不同物種(如來源于牛、貓、狗、豚鼠、人、綿羊、小鼠和大鼠等)的纖維蛋白原具有相似的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。因此,一般來源于一種哺乳動物的纖維蛋白原可與其他來源的凝血酶交叉反應(yīng),相反地來自一種哺乳動物蛋白的凝血酶液也可注入多種動物,發(fā)生凝血反應(yīng)。Recombinant Human MCP-4/CCL13