利用PCR技術擴增得到編碼土豆羧肽酶抑制劑(carboxypeptidaseinhibitorfrompotato,CPI)活性多肽基因,克隆于表達載體pGEX一4T一1的多克隆位點中,得到重組質粒pGCPI,測序后將重組質粒轉化到受體茵EscherichiacoliBL21中。重組茵經(jīng)IPTG誘導表達,超聲波破茵后,通過谷胱甘肽sepheroseFF親和層析柱一步純化得到融合蛋白,純度大于97%。融合蛋白經(jīng)凝血酶切割并分離除去谷胱甘肽一S一轉移酶后得到純度大于98%的重組CPI,ELISA鑒定產物具有免疫原性,體外檢測表明其促進纖溶的生物功能與天然CPI無明顯差異。透明質酸的衍生物可以作為基因傳遞的載體,或用于疫苗佐劑,增強反應。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,可特異切割賴氨酸及精氨酸C末端形成的肽鍵。重組胰蛋白酶多用大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達并經(jīng)過多步層析純化獲得,無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性,其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源。因其無動物源污染性和純度高,在醫(yī)藥開發(fā)、生化研究、蛋白組學等領域中有著廣泛的應用。翌圣目前可提供2款重組胰蛋白酶,分別為藥典級(Cat#40512ES)、質譜級(Cat#20416ES)藥典級:大腸桿菌表達的重組胰蛋白酶,氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶完全一致,生產過程不使用任何動物源原料,無外源性的病毒污染,可替代豬胰腺來源胰蛋白酶應用于各種生物技術過程中,如:細胞培養(yǎng)、細胞發(fā)酵、蛋白質的酶解或各種組織的細胞分離等。本產品純度高、不含雜酶、宿主蛋白和DNA殘留量符合藥典標準,避免了雜質對細胞生長的影響,pH為7.0-9.0,穩(wěn)定pH為2±0.5。質譜級:畢赤酵母表達的重組豬胰蛋白酶,在GMP法規(guī)下生產,不含任何動物源成分,無動物源性的病毒污染,天然缺乏糜蛋白酶活性,并已過濾除菌。Recombinant Cynomolgus/Rhesus macaque Her3 Protein,His Tag透明質酸的生物相容性使其在生物材料領域具有潛在應用,如作為藥物遞送載體。
3C蛋白酶(3C Protease),也稱為3Cpro或3C樣蛋白酶(3CLpro),是一類在RNA病毒復制中發(fā)揮關鍵作用的酶。它們負責切割病毒的多聚蛋白前體,從而釋放出成熟的病毒蛋白,這些蛋白對于病毒的復制和組裝至關重要。3C蛋白酶在多種病毒中都有發(fā)現(xiàn),包括冠狀病毒、小RNA病毒等。結構與功能3C蛋白酶通常具有特定的酶切位點,能夠識別并切割特定的氨基酸序列。例如,小RNA病毒科的3C蛋白酶識別位點為Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro,切割位點位于谷氨酰胺(Gln)和甘氨酸(Gly)之間,稱為Q-G位點4。抗病毒藥物開發(fā)3C蛋白酶因其在病毒生命周期中的關鍵作用,成為抗病毒藥物開發(fā)的重要靶點。通過抑制3C蛋白酶的活性,可以有效阻斷病毒的復制過程。例如,SARS-CoV-2(病毒)的3CLpro是抗冠狀病毒藥物的重要靶點,西湖大學胡奇團隊等合作揭示了SARS-CoV-2 3CLpro潛在耐藥機制,為解決潛在的耐藥問題提供了重要信息3。耐藥性研究隨著3CLpro抑制劑的使用,其耐藥問題也日益受到關注。研究表明,3CLpro的某些突變可能導致病毒對抑制劑產生耐藥性。
抑肽酶(Aprotinin),又稱為抑蛋白酶肽,是一種競爭性、可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑,可與絲氨酸蛋白酶形成穩(wěn)定復合物并阻斷酶的活性位點,這種結合是可逆的,大多數(shù)的抑肽酶-蛋白酶復合物在極端的pH<3.0的條件下解除結合。抑肽酶抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶、激肽釋放酶和血纖維蛋白溶酶,不能抑制Xa因子和凝血酶。從結構上來說,抑肽酶是一種來自牛肺的單體球狀蛋白,由58個氨基酸組成并排列在具有三個交聯(lián)二硫鍵的單個多肽鏈中。重組抑肽酶采用大腸桿菌表達,在GMP法規(guī)下生產,不含任何動物源成分,無動物源性的病毒污染,氨基酸序列與來源于牛肺的抑肽酶完全一致,具有與動物源性抑肽酶相同的酶學性質,可替代動物源性抑肽酶用于各種生物技術過程中,如:重組蛋白生產中抑制絲氨酸蛋白酶的活性;細胞培養(yǎng)等。腸激酶能夠特異性識別并切割含有Aspartate-Aspartate-Aspartate-Lysine (DDDK) 序列的蛋白質。
重組腸激酶(rEK)是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段,氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致,有著和天然提取的腸激酶同樣特異的酶切位點,切割位點Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合標簽,同時重組腸激酶(rEK)具有比天然酶更高的切割活性。重組腸激酶為采用重組大腸桿菌分泌表達的高純度、高活性、高特異的牛腸激酶,不含其他蛋白酶,可以在較寬pH范圍(4.5-9.5)和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白,并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品不含標簽,由于具有極高酶切活性,酶切反應使用量少,不影響下游蛋白應用,可不考慮除去。產品信息規(guī)格100U/200U/500U/1000U/5000U產品性質來源(Source)大腸桿菌表達分子量(MolecularWeight)理論值25.85kDa外觀(Appearance)澄清、無色至淡黃色液體酶濃度(EnzymeConcentration)≥5U/uL活性定義(ActivityDefinition)一個活性單位定義為25°C,12-16h,腸激酶用于重組抗體和其他蛋白質的質量檢測,確保其正確折疊和功能。Recombinant Human MSLN/Mesothelin Protein,His-Avi Tag
泛素蛋白(Ubiquitin,簡稱Ub)是一種在真核細胞中普遍存在的小分子蛋白,具有高度保守性。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag
N-糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個酶活力單位指在10μL的反應體系中,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。儲存條件-15~-25℃保存,有效期1年。使用說明變性條件下蛋白質去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目標糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,冰上冷卻,離心10秒;3)加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,總反應體積20μL;4)加入0.2~0.5μL的PNGase,輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。非變性條件下蛋白質去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目標糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL。2)加入0.5~1μL的PNGaseF,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長孵育時間。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag