pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過特殊改造的融合蛋白，由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成，具有以下主要應(yīng)用：1.**高通量測序建庫**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測序的DNA文庫，通過其轉(zhuǎn)座酶活性實現(xiàn)DNA片段化，同時加上測序接頭，簡化了傳統(tǒng)DNA測序建庫的多步過程。2.**CUT&Tag技術(shù)**：這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法，pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合，將轉(zhuǎn)座酶帶到目標蛋白附近進行DNA切割和標簽添加，實現(xiàn)對蛋白質(zhì)結(jié)合位點的高通量測序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點，適用于表觀遺傳學、干細胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實驗，這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法，通過轉(zhuǎn)座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA，然后在切割位點加上測序接頭，進行后續(xù)的測序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫**：有研究開發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫方法，例如SHERRY方法，它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈，簡化了建庫過程，適用于單細胞轉(zhuǎn)錄組測序，提高了樣本的利用率和測序速度。

轉(zhuǎn)座酶是一類能夠催化轉(zhuǎn)座子（一種可移動的DNA序列）在基因組中從一個位置移動到另一個位置的酶。轉(zhuǎn)座子可以在DNA分子上“跳躍”，在新的位置上插入自己的拷貝，而原始位置的轉(zhuǎn)座子則可能被切除或保留。轉(zhuǎn)座酶的作用是轉(zhuǎn)座過程中的關(guān)鍵因素，它們可以被分為兩類：1.**復(fù)制型轉(zhuǎn)座酶**：在復(fù)制型轉(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座子首先被復(fù)制，然后復(fù)制的拷貝到新的基因組位置，原始的轉(zhuǎn)座子留在原位。這種機制通常涉及到“復(fù)制-粘貼”的過程。2.**剪切型轉(zhuǎn)座酶**：在剪切型轉(zhuǎn)座過程中，轉(zhuǎn)座子從原始位置被切除，然后到新的基因組位置。這涉及到“剪切-粘貼”的過程。轉(zhuǎn)座酶的活性和轉(zhuǎn)座子的移動可以對基因組的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要影響，包括：-**基因突變**：轉(zhuǎn)座子的插入可能破壞基因的正常功能，導(dǎo)致突變。-**基因組多樣性**：轉(zhuǎn)座活動增加了基因組的多樣性，有助于物種適應(yīng)環(huán)境變化。-**基因調(diào)控**：轉(zhuǎn)座子的插入可能激起或抑制某些基因的表達。-**新基因產(chǎn)生**：在某些情況下，轉(zhuǎn)座子的移動可以導(dǎo)致新基因的產(chǎn)生。

1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補DNA（cDNA）的試劑盒，它通過逆轉(zhuǎn)錄過程從信使RNA（mRNA）或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類試劑盒通常包含逆轉(zhuǎn)錄酶（ReverseTranscriptase，RT）和其他必要的組分，以確保高效和準確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性，這意味著在合成cDNA鏈的過程中不會發(fā)生RNA的降解，從而可以產(chǎn)生更高產(chǎn)量的全長cDNA，特別是從較長的模板（可達13kb）。該試劑盒通常包括以下組分：-逆轉(zhuǎn)錄酶，如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase，它通過點突變完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor，這是一種重組蛋白，可有效保護RNA在高達55°C的溫度下不受RNases的降解。-緩沖液、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）和其他輔助成分，以支持cDNA合成反應(yīng)。-有時還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作為PCR或?qū)崟rPCR的模板直接使用，也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大。此外，可以在cDNA合成過程中加入放射性或非放射性標記的核苷酸，以便在包括微陣列在內(nèi)的雜交實驗中作為探針使用。

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的高活性是其重要特性之一，這種高活性主要來源于以下幾個方面：1.**轉(zhuǎn)座酶突變體**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是由Tn5轉(zhuǎn)座酶的高活性突變體構(gòu)成的。這種突變體相比野生型Tn5轉(zhuǎn)座酶，在體外的轉(zhuǎn)座效率顯著提高，通常提升1000倍以上。2.**ProteinA融合**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶將ProteinA與高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶融合，這種融合不僅保留了Tn5轉(zhuǎn)座酶的高效DNA切割能力，還通過ProteinA的抗體結(jié)合特性，提高了對特定DNA序列的靶向能力。3.**轉(zhuǎn)座隨機性**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶能夠在整個基因組上實現(xiàn)隨機的DNA切割，這為高通量測序提供了廣的覆蓋度。4.**穩(wěn)定性**：高活性的pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶在各種實驗條件下都能保持穩(wěn)定，包括在不同的溫度和pH值條件下。5.**插入位點易測序**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶產(chǎn)生的DNA片段具有明確的插入位點，這些位點容易被高通量測序技術(shù)識別和分析。6.**高效片段化**：在CUT&Tag等實驗中，pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶能夠高效地實現(xiàn)目標蛋白結(jié)合DNA的片段化，為后續(xù)的測序和分析打下基礎(chǔ)。7.**低細胞投入量**：由于其高活性，pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶允許從極少量的細胞中進行實驗，如單細胞水平的研究。

RNaseH-（RNaseH缺乏）通常是指在某些逆轉(zhuǎn)錄酶中通過突變消除了RNaseH活性的酶。這種酶在合成cDNA鏈時不會降解RNA模板，因此可以用于生成更高產(chǎn)量的全長cDNA，尤其是在使用較長的RNA模板時。RNaseH-的應(yīng)用主要包括：1.**全長cDNA合成**：由于RNaseH-不會在逆轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA模板，因此可以合成更長的cDNA片段。2.**提高cDNA產(chǎn)量**：在某些情況下，使用RNaseH-可以提高cDNA的產(chǎn)量，特別是當RNA模板質(zhì)量較高時。3.**避免RNA降解**：在逆轉(zhuǎn)錄過程中，RNaseH-有助于保護RNA模板不被降解，這對于后續(xù)的分子生物學實驗非常重要。4.**特定基因表達分析**：RNaseH-可用于合成特定基因的cDNA，進而進行基因表達分析。5.**RNA病毒研究**：在研究RNA病毒時，RNaseH-可用于合成病毒RNA的cDNA，以便進一步研究病毒的基因組。6.**基因克隆和功能研究**：合成的全長cDNA可以用于克隆和研究基因的功能。7.**提高qPCR和RT-qPCR的效率**：使用RNaseH-合成的cDNA作為模板，可以提高定量PCR的效率和準確性。8.**RNA干擾和基因沉默研究**：RNaseH-有助于合成siRNA或shRNA，進而研究基因沉默的效果。

GPCR家族是一類存在于生物體中的跨膜蛋白，它們可以識別并與外界分子相互作用，引發(fā)各種細胞內(nèi)信號。Recombinant Human PSMA/FOLH1 Protein,hFc Tag

1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中的逆轉(zhuǎn)錄酶（ReverseTranscriptase,RT）具有一個關(guān)鍵特性：它們通過特定的突變消除了RNaseH活性。RNaseH是一種通常與某些逆轉(zhuǎn)錄酶相關(guān)的酶活性，它能夠降解RNA。然而，在1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中，逆轉(zhuǎn)錄酶被設(shè)計成不具有這種降解RNA的能力，從而在合成cDNA的鏈時保護RNA模板不被降解。以下是1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中逆轉(zhuǎn)錄過程的一般步驟，以及如何避免RNA降解：1.**RNA模板準備**：首先確保RNA模板的純度和完整性，避免DNA污染。可以通過DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA污染。2.**混合反應(yīng)組分**：將RNA模板、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）、逆轉(zhuǎn)錄引物（如oligo(dT)或隨機引物）和緩沖液混合。3.**逆轉(zhuǎn)錄酶添加**：加入經(jīng)過突變處理的逆轉(zhuǎn)錄酶，這種酶缺乏RNaseH活性，因此不會在合成過程中降解RNA。4.**逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)**：在適宜的溫度下進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄酶根據(jù)RNA模板合成cDNA鏈。5.**終止反應(yīng)**：通過加熱至一定溫度來終止逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。Recombinant Human PSMA/FOLH1 Protein,hFc Tag