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Recombinant Human LRIG1 Protein

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-09

5'DNA腺苷?;噭┖械膯尾椒磻?yīng)是一種高效的酶促反應(yīng),用于在DNA分子的5'端添加一個(gè)腺苷酸(AMP)基團(tuán)。這個(gè)過(guò)程通常涉及以下步驟:1.**準(zhǔn)備反應(yīng)混合物**:-根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū),將所需的5'磷酸化的單鏈DNA(ssDNA或pDNA)、MthRNA連接酶(或其他腺苷酰化酶)、ATP和相應(yīng)的緩沖液按比例混合。2.**孵育反應(yīng)**:-將混合好的反應(yīng)體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時(shí)間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端。3.**酶失活**:-反應(yīng)完成后,通常在85℃孵育5分鐘以失活腺苷?;福@一步是為了防止后續(xù)的去腺苷?;F(xiàn)象,確保反應(yīng)的穩(wěn)定性。4.**產(chǎn)物收集**:-由于轉(zhuǎn)化效率高,通常不需要進(jìn)行凝膠純化步驟??梢酝ㄟ^(guò)乙醇沉淀等方法收集腺苷?;蟮腄NA產(chǎn)物。5.**產(chǎn)物應(yīng)用**:-收集的腺苷?;疍NA可以直接用于后續(xù)的克隆、測(cè)序、連接或其他分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**注意事項(xiàng)**:-確保所有操作在無(wú)RNA酶和無(wú)DNA酶的環(huán)境中進(jìn)行,以避免污染。-使用時(shí)需注意反應(yīng)體系的準(zhǔn)確性,確保底物、酶和ATP的比例適當(dāng)。單步反應(yīng)的優(yōu)勢(shì)在于簡(jiǎn)化了操作流程,減少了樣品處理的復(fù)雜性,并且由于高轉(zhuǎn)化效率,避免了耗時(shí)的純化步驟,從而節(jié)省了時(shí)間和成本。利用His標(biāo)簽通過(guò)親和層析從細(xì)胞裂解物中純化目標(biāo)蛋白,然后可能通過(guò)離子交換層析、等方法進(jìn)一步提純。Recombinant Human LRIG1 Protein,His Tag

Recombinant Human LRIG1 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

DNA瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù),用于分離、鑒定和定量DNA片段。以下是關(guān)于DNA瓊脂糖凝膠電泳的一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**原理**:-利用瓊脂糖凝膠作為介質(zhì),DNA片段在電場(chǎng)作用下根據(jù)其大小和電荷差異進(jìn)行分離。較小的DNA片段遷移速度快,而較大的片段遷移速度慢。2.**瓊脂糖**:-一種由瓊脂糖粉末和緩沖液(如TAE或TBE)混合制成的凝膠。瓊脂糖濃度通常在0.7%到2%之間,濃度越高,分辨率越高,但凝膠孔隙越小,遷移速度越慢。3.**樣品準(zhǔn)備**:-DNA樣品通常需要在加載前進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚恚缂兓?、稀釋,有時(shí)還需添加樣品緩沖液以保證樣品在電泳過(guò)程中的穩(wěn)定性。4.**加載樣品**:-使用微量移液管將樣品和加載緩沖液(通常含有追蹤染料,如溴酚藍(lán))混合后,小心地加載到凝膠孔中。5.**電泳**:-將凝膠置于電泳槽中,連接電源,施加恒定電壓進(jìn)行電泳。電壓和時(shí)間根據(jù)凝膠濃度和所需分辨率進(jìn)行調(diào)整。6.**染色**:-電泳完成后,為了可視化DNA條帶,通常使用熒光染料如EB(溴化乙錠)或SYBRGreen進(jìn)行染色。染色后的凝膠在紫外光下觀察,DNA條帶會(huì)發(fā)出熒光。7.**分析**:-通過(guò)比較DNA條帶的位置和已知大小的DNA標(biāo)準(zhǔn)品(DNAladder),可以估計(jì)DNA片段的大小。

RNA/DNA/蛋白抽提試劑盒牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的反應(yīng)溫度為37°C。在這個(gè)溫度下,酶的活性高,能夠有效地進(jìn)行DNA的切割和連接。

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pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過(guò)特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,具有以下主要應(yīng)用:1.**高通量測(cè)序建庫(kù)**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測(cè)序的DNA文庫(kù),通過(guò)其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化,同時(shí)加上測(cè)序接頭,簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)DNA測(cè)序建庫(kù)的多步過(guò)程。2.**CUT&Tag技術(shù)**:這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加,實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測(cè)序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),適用于表觀遺傳學(xué)、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn),這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,通過(guò)轉(zhuǎn)座酶在沒(méi)有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA,然后在切割位點(diǎn)加上測(cè)序接頭,進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)**:有研究開(kāi)發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡(jiǎn)化了建庫(kù)過(guò)程,適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,提高了樣本的利用率和測(cè)序速度。

SgMagBeads是一種磁性納米粒子,通常用于生物樣品的提取和純化過(guò)程,包括核酸(DNA或RNA)的提取。在磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒中,SgMagBeads或類似的磁珠產(chǎn)品作為組分之一,發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。以下是SgMagBeads與磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒之間的聯(lián)系:1.**純化介質(zhì)**:-SgMagBeads作為磁珠法質(zhì)粒抽提試劑盒中的一個(gè)關(guān)鍵組分,充當(dāng)核酸純化介質(zhì)的角色。2.**特異性吸附**:-在質(zhì)粒DNA的提取過(guò)程中,SgMagBeads能夠特異性地吸附裂解后的質(zhì)粒DNA,而其他雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、RNA等則不被吸附。3.**快速分離**:-利用外部磁場(chǎng),SgMagBeads可以迅速與溶液分離,從而實(shí)現(xiàn)快速的樣品純化。4.**洗滌和去除雜質(zhì)**:-在吸附了質(zhì)粒DNA后,SgMagBeads可以通過(guò)洗滌步驟去除吸附在其表面的雜質(zhì),提高DNA的純度。5.**洗脫**:-在洗滌去除雜質(zhì)后,SgMagBeads上的質(zhì)粒DNA可以通過(guò)適當(dāng)?shù)南疵撘合疵撓聛?lái),得到高純度的質(zhì)粒DNA樣品。6.**操作簡(jiǎn)便性**:-SgMagBeads的使用簡(jiǎn)化了質(zhì)粒DNA的提取過(guò)程,減少了傳統(tǒng)方法中需要的離心步驟,使得操作更加簡(jiǎn)便快捷。

SpCas9-NLS的應(yīng)用范圍廣泛,可用于細(xì)胞內(nèi)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)的基因編輯。

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dATPSolution(脫氧腺苷三磷酸溶液)是一種常用的分子生物學(xué)試劑,通常以100mM的濃度提供。這種溶液主要用于支持DNA的合成過(guò)程,如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、DNA測(cè)序、填入反應(yīng)、切口平移、cDNA合成和TdT加尾反應(yīng)等。dATP的化學(xué)結(jié)構(gòu)是2'-脫氧腺苷-5'-三磷酸,它是DNA聚合酶在DNA復(fù)制過(guò)程中用來(lái)合成DNA鏈的原料之一。在Sanger測(cè)序中,dATP與ddATP(雙脫氧腺苷三磷酸)一起使用,后者是dATP的一種衍生物,缺少3'-OH基團(tuán),用于鏈終止反應(yīng)。dATP溶液應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的條件下以保持其穩(wěn)定性和活性,有效期通常為兩年。在生產(chǎn)過(guò)程中,dATP通常按照ISO9001標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,并在D級(jí)清潔室中進(jìn)行以確保高質(zhì)量和純度。HPLC確認(rèn)的純度通常大于99%。dATP溶液不含qPCR、PCR、逆轉(zhuǎn)錄抑制劑,也不含DNase、RNase以及人類和大腸桿菌DNA,以避免實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的污染。FnCas12a特異性識(shí)別并剪切帶PAM序列的雙鏈DNA(dsDNA)靶標(biāo),其PAM序列為5'-TTN-3',與Cas9的PAM序列不同。Kemptide (Phospho-Ser5)

與其他Cas12蛋白相比,F(xiàn)nCas12a蛋白的分子量較小,大約在400-700個(gè)氨基酸之間。Recombinant Human LRIG1 Protein,His Tag

T4UvsX重組酶的保存和純化是實(shí)驗(yàn)室工作流程中的重要環(huán)節(jié),確保了酶的穩(wěn)定性和活性。以下是根據(jù)搜索結(jié)果提供的信息:保存條件:-T4UvsX重組酶通常在-20°C的條件下保存,可以保持3年的有效期。-某些產(chǎn)品說(shuō)明中提到,該制品不含甘油,可用于建立凍干體系,這可能對(duì)長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸有額外的好處。-建議避免反復(fù)凍融,因?yàn)檫@可能會(huì)影響酶的活性。純化過(guò)程:-T4UvsX重組酶是由大腸桿菌表達(dá)和純化的。這意味著科學(xué)家首先將T4噬菌體的uvsX基因克隆到適合在大腸桿菌中表達(dá)的質(zhì)粒載體中。-然后將這個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌宿主細(xì)胞中,使其表達(dá)T4UvsX蛋白。-接下來(lái),通過(guò)一系列生化步驟從大腸桿菌細(xì)胞中提取和純化T4UvsX蛋白,這些步驟可能包括細(xì)胞裂解、離心、層析等技術(shù)。注意事項(xiàng):-T4UvsX重組酶的保存液中甘油含量為20%,建議單獨(dú)分裝保存,以避免反復(fù)凍融。-該酶無(wú)核酸酶活性,這表明它在催化反應(yīng)時(shí)不會(huì)切割DNA鏈,而是促進(jìn)DNA鏈的重組。-本產(chǎn)品用于科研用途,不應(yīng)用于臨床診斷。應(yīng)用:-T4UvsX重組酶主要用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA),這是一種快速、靈敏的核酸檢測(cè)技術(shù)。通過(guò)遵循這些保存和純化指南,研究人員可以確保T4UvsX重組酶在實(shí)驗(yàn)中的有效性和可靠性。Recombinant Human LRIG1 Protein,His Tag