Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,簡稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應(yīng)用的酶,以下是其主要特點和應(yīng)用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**酶切活性**:對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強的嗜磷酸性,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續(xù)性的堿性核酸外切酶,可以連續(xù)地將核酸切割成為單個堿基,切割比較高速率可以達到1000nt/S。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-生成單鏈PCR產(chǎn)物用于DNA測序。-DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析。-滾環(huán)擴增。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產(chǎn)物的克隆。-質(zhì)粒制備凈化。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37oCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。UBE2L3在調(diào)節(jié)NF-κB信號通路中的作用可能對免疫反應(yīng)和炎癥過程至關(guān)重要。Recombinant Mouse PLAU/uPA Protein,His-Avi Tag
耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveUltraNuclease)是一種重組非特異性核酸內(nèi)切酶,具有以下特點和應(yīng)用:1.**來源與表達**:耐高鹽全能核酸酶來源于海洋微生物,通過基因工程改造在大腸桿菌(_Escherichiacoli_)中表達純化。2.**活性條件**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**病毒純化、疫苗生產(chǎn)**:作為宿主殘留核酸去除試劑,將宿主殘留核酸降至皮克(pg)級別,提高生物制品功效和安全性。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**:用于去除核酸污染,降低細胞上清和細胞裂解液的粘度,提高蛋白純化效率及功能研究。-**防止細胞結(jié)團**:有效防止細胞和疫苗研究中外周血單核細胞(PBMC)的結(jié)團。4.**產(chǎn)品性質(zhì)**:-分子量:24.7kDa。-等電點:9.61。-純度:≥99%。-酶活:250-300U/μL。-適溫度:37℃(工作范圍0-42℃)。-輔助因子:1-10mMMg2+。5.**儲存條件**:以無菌液體酶的形式提供,儲存于緩沖液(25mMTris-HCl,5mMMgCl2,500mMNaCl,50%Glycerol,pH7.5)中,無色透明液體。干冰運輸,-15℃~-25℃保存,有效期2年。Recombinant Mouse PLAU/uPA Protein,His-Avi Tag泛素分子可以通過其內(nèi)部的賴氨酸殘基(如Lys48)與其他泛素分子形成多聚泛素鏈。
提取的病毒核酸可以直接用于多種實驗,主要包括:1.**實時熒光定量PCR(qPCR)**:這是一種常用的技術(shù),可以對病毒核酸進行定量檢測。它通過實時監(jiān)測PCR過程中的熒光信號來確定病毒核酸的數(shù)量。例如,病毒核酸檢測就是基于此技術(shù),通過設(shè)計特異性引物和探針,對病毒的靶基因進行定性檢測。2.**逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)**:這項技術(shù)用于檢測RNA病毒,通過將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后進行PCR擴增,以檢測病毒的存在。RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣,可以用于檢測細胞、組織中RNA病毒的含量。3.**等溫擴增法**:包括環(huán)介導(dǎo)的等溫擴增(LAMP)和切口延伸等溫擴增(NEAR),這些方法在恒溫條件下進行,無需復(fù)雜的設(shè)備,適用于快速、現(xiàn)場的病毒核酸檢測。4.**數(shù)字PCR(dPCR)**:這是一種高度靈敏的技術(shù),可以對病毒核酸進行定量。它通過將樣本分配到成千上萬的微小反應(yīng)室中,每個反應(yīng)室單獨進行PCR擴增,從而實現(xiàn)對病毒核酸的精確計數(shù)。5.**核酸雜交技術(shù)**:如熒光原位雜交(FISH),可以用于檢測特定病毒核酸序列在細胞或組織中的存在和定位。
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息:來源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫擴增反應(yīng),如LAMP和CPA等。應(yīng)用:主要應(yīng)用于等溫DNA擴增,包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)和其他等溫擴增技術(shù)。規(guī)格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式:提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號14402ES,以及凍干粉形式的產(chǎn)品,貨號14405ES,不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,低至5copies目的基因可測,且在飛克(fg)級別的模板量下也能快速達到閾值。在37°C下,該酶可以保持相對穩(wěn)定的效應(yīng)長達5天,并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲存條件:建議在-25℃至-15℃下儲存,以保持產(chǎn)品活性,并避免反復(fù)凍融。泛素分子可以通過其內(nèi)部的賴氨酸殘基與其他泛素分子形成多聚泛素鏈,這一步驟通常由E3酶催化。
BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物學(xué)實驗中都是常用的酶,但它們之間存在一些關(guān)鍵的不同點:1.**來源和熱穩(wěn)定性**:-**TaqDNA聚合酶**來源于嗜熱菌Thermusaquaticus,具有很好的耐熱性,能夠承受PCR的熱變性步驟。-**BstDNA聚合酶**來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),同樣具有較高的熱穩(wěn)定性,適用于等溫擴增,如LAMP技術(shù),無需PCR熱循環(huán)。2.**酶活性**:-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性,但沒有3'-5'外切酶活性。這意味著它在DNA合成過程中可以校正一些錯誤,但保真性相對較低。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和強鏈置換活性,但缺乏5'-3'外切酶活性。這使得它在等溫擴增中更為有效,尤其是在需要高保真度和快速擴增的應(yīng)用中。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技術(shù),適用于各種DNA片段的擴增,包括復(fù)雜模板和長片段的擴增。-**BstDNA聚合酶**特別適用于等溫擴增技術(shù),如LAMP,這些技術(shù)不需要溫度循環(huán),適用于快速、低成本的DNA擴增。4.**擴增速度和效率**:-**BstDNA聚合酶**在等溫擴增中顯示出比傳統(tǒng)TaqDNA聚合酶更快的擴增速度和更高的產(chǎn)量,尤其是在優(yōu)化的LAMP反應(yīng)中。
Multiplex Probe qPCR Mix 已預(yù)混了低濃度ROX參比染料,適用于需要低濃度ROX校正的熒光定量PCR儀 。Recombinant Mouse PLAU/uPA Protein,His-Avi Tag
在PCR實驗中,為了避免引物與已知序列的交叉反應(yīng),從而確保實驗的特異性,以下是一些關(guān)鍵的引物設(shè)計原則和策略:1.**選擇高保守性區(qū)域**:引物比較好設(shè)計在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi),這樣可以確保引物與目標序列的特異性結(jié)合。通過比較不同物種的同一基因序列,可以確定基因的保守區(qū)。2.**避免引物與非目標序列的同源性**:設(shè)計引物時,應(yīng)避免與基因組中的重復(fù)序列、假基因或高同源性區(qū)域設(shè)計引物??梢酝ㄟ^BLAST等工具對引物進行同源性分析,確保引物只與目標序列結(jié)合。3.**引物長度和GC含量**:引物長度一般在15-30堿基之間,常用的是18-27bp。GC含量一般為40%-60%,以45-55%為宜。過高或過低的GC含量都不利于引發(fā)反應(yīng),上下游引物的GC含量和Tm值應(yīng)保持接近。4.**避免引物的3'端錯配**:引物3'端的堿基應(yīng)嚴格要求配對,特別是倒數(shù)第二個堿基,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。引物3'端比較好不要選擇A,比較好選擇T,因為當末位鏈為T時,錯配的引發(fā)效率降低。5.**避免引物自身及引物之間的互補序列**:引物自身不應(yīng)存在互補序列,否則引物自身會折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu),影響引物與模板的復(fù)性結(jié)合。前后引物之間也不應(yīng)具有互補性,尤其應(yīng)避免3'端的互補重疊以防止引物二聚體的形成。Recombinant Mouse PLAU/uPA Protein,His-Avi Tag