AdvanceFast1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)Plus的RNAseH-功能指的是該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性。RNaseH是一種酶,它能夠特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA部分,而不作用于單鏈或雙鏈的DNA和RNA。在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中,RNaseH活性的存在有助于控制RNA:cDNA的比例,從而在擴增效率一致的情況下,能夠更真實地反映原始mRNA中的基因豐度或表達量信息。然而,對于某些應(yīng)用,如合成長鏈cDNA,RNaseH活性可能不利,因為它可能會在全長cDNA合成完成之前降解RNA模板。因此,RNaseH-的逆轉(zhuǎn)錄酶可以用于合成多拷貝的cDNA,但可能會導(dǎo)致模板基因表達量的失真。AdvanceFast1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)Plus通過使用RNaseH-的逆轉(zhuǎn)錄酶,有助于提高長鏈cDNA的合成效率,尤其是在合成超過6kb的cDNA時。此外,該試劑盒還提供了gDNADigesterMix,用于去除RNA模板中殘留的基因組DNA污染,保證后續(xù)實驗結(jié)果的可靠性。它還提供了RandomPrimersN6和Oligo(dT)18兩種cDNA合成引物,用戶可以根據(jù)需要選擇使用,以滿足不同的實驗需求。合成的單鏈cDNA產(chǎn)物可以直接用于后續(xù)的PCR或qPCR反應(yīng)。通過固液分離和超濾技術(shù)進行粗純,這些技術(shù)可以在不損害蛋白活性的情況下去除大分子雜質(zhì)和沉淀物。吉林CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達技術(shù)服務(wù)開發(fā)
在生物科技日新月異的發(fā)展浪潮中,江畢赤酵母表達VLP(病毒樣顆粒)技術(shù)服務(wù)正逐漸嶄露頭角,為眾多科研和應(yīng)用領(lǐng)域帶來了新的契機與突破。江畢赤酵母作為一種的表達系統(tǒng),在VLP的生產(chǎn)中具有獨特的優(yōu)勢。它能夠?qū)?fù)雜的蛋白質(zhì)進行正確的折疊和修飾,使得表達出的VLP更接近天然病毒的結(jié)構(gòu)和功能。與其他表達系統(tǒng)相比,江畢赤酵母具有生長速度快、易于培養(yǎng)和大規(guī)模發(fā)酵的特點,能夠高效地生產(chǎn)大量的VLP。這不僅降低了生產(chǎn)成本,還提高了生產(chǎn)效率,為VLP的廣泛應(yīng)用奠定了堅實的基礎(chǔ)。微生物基因編輯技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)重組類人膠原蛋白 (rHLC),它具有低免疫原性和隱藏病毒的風(fēng)險小,并且可以特別定制以用于特定應(yīng)用。
UNG酶(Uracil-N-Glycosylase)在qRT-PCR中的主要作用是防止PCR產(chǎn)物的污染,提高實驗的特異性和準(zhǔn)確性。其工作原理如下:1.**替代dTTP**:在PCR反應(yīng)中,使用dUTP替代dTTP,這樣擴增產(chǎn)物中的胸腺嘧啶(T)被尿嘧啶(U)取代,形成了含有dU的DNA鏈。2.**降解尿嘧啶**:UNG酶能夠識別并水解DNA中的尿嘧啶堿基,將其從DNA鏈中釋放出來。這一過程在PCR反應(yīng)前的50℃下進行,UNG酶將反應(yīng)體系中已有的含U的DNA污染物降解,消除了由于污染DNA產(chǎn)生的擴增可能性。3.**高溫滅活**:在PCR的高溫變性步驟中(通常在95℃),UNG酶被滅活,因此不會影響新合成的含U的PCR產(chǎn)物。4.**消除污染**:UNG酶可以消除高達10^8^的U-DNA產(chǎn)物,有效減少因PCR產(chǎn)物污染導(dǎo)致的假陽性結(jié)果,從而保證qRT-PCR結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性。5.**熱啟動聚合酶的使用**:UNG酶常與熱啟動Taq聚合酶一起使用,以建立含有UNG/dUTP防污染體系的熱啟動PCR反應(yīng)系統(tǒng),進一步減少非特異性擴增和污染。通過UNG酶的使用,可以有效地控制qRT-PCR反應(yīng)中的污染問題,提高實驗結(jié)果的可靠性。
RNaseInhibitor,HumanPlacenta是一種從人胎盤中提取的核糖核酸酶抑制劑,或通過大腸桿菌重組表達。以下是其主要特點和用途:1.**抑制作用**:能夠有效抑制RNaseA、RNaseB、RNaseC和人胎盤核糖核酸酶的活性,保護RNA不被這些酶降解。2.**高親和力結(jié)合**:RNaseInhibitor與RNA酶的結(jié)合非??焖伲瑤缀踉诩尤氲乃查g就會形成復(fù)合物從而抑制其酶活性,且這種結(jié)合是非競爭性的,按1:1比例結(jié)合。3.**pH穩(wěn)定性**:在pH5-8范圍內(nèi)保持其RNA酶抑制活性,在pH7-8時抑制活性比較高。維持其活力需要至少在溶液中含有1mMDTT。4.**兼容性**:與TaqDNAPolymerase、AMV或M-MuLVReverseTranscriptases、SP6、T7、T3RNApolymerase等酶兼容,不會抑制這些酶的活性。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:用于cDNA合成,體外轉(zhuǎn)錄,體外翻譯,以及mRNA-protein復(fù)合物分離純化等過程中保護RNA不被降解;還可用于特定RNase活性的鑒定等。6.**儲存條件**:-20℃保存,兩年有效。使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上,使用完畢后宜立即放置于-20oC保存。7.**活性定義**:將能夠抑制5ngRNaseA的50%活性的酶量定義為一個活性單位。8.**純度**:不含DNA內(nèi)切酶和外切酶,不含RNA酶。根據(jù)目標(biāo)蛋白的特性,選擇合適的表達系統(tǒng),如原核(如大腸桿菌)、真核(如酵母、)或無細(xì)胞系統(tǒng)。
TthDNAPolymerase(5U/μL)在分子生物學(xué)實驗中的應(yīng)用非常廣,主要包括以下幾個方面:1.**常規(guī)PCR擴增**:TthDNAPolymerase能夠在74°C下進行DNA復(fù)制,具有5′-3′DNA聚合酶活性和5′-3′核酸外切酶活性,適用于常規(guī)PCR反應(yīng),可以高效地擴增目標(biāo)DNA片段。2.**逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)**:在Mn2+存在的條件下,TthDNAPolymerase表現(xiàn)出較強的逆轉(zhuǎn)錄活性,可以用于一步法RT-PCR反應(yīng),有效地將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,并進行后續(xù)的PCR擴增。這種特性使得TthDNAPolymerase在RNA樣本檢測中非常有用,尤其是在需要快速從RNA得到cDNA的實驗中。3.**熱啟動PCR(HotStartPCR)**:TthDNAPolymerase可以用于熱啟動PCR,這是一種提高PCR反應(yīng)特異性的技術(shù)。通過在低溫下封閉DNA聚合酶的活性部位,避免非特異性擴增,然后在高溫下解除封閉,從而保證只產(chǎn)生特異性擴增。4.**耐受PCR抑制成分**:TthDNAPolymerase對于血液、肌肉等生物組織中含有的肌紅蛋白等PCR抑制成分具有較強的耐受性,十分適用于粗樣本快速檢測。5.**高靈敏度檢測**:TthDNAPolymerase的PCR擴增檢測靈敏度可達100pg,這使得它在需要高靈敏度檢測的實驗中非常有用。
用精細(xì)化酶法提取技術(shù),通過控制酶解條件,有效去除膠原蛋白的端肽,降低免疫原性,同時保持膠原蛋白活性 。吉林CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達技術(shù)服務(wù)開發(fā)
DNA聚合酶識別dNTPs的過程是一個精確的分子識別過程,它涉及以下幾個關(guān)鍵步驟:1.**模板識別**:DNA聚合酶首先識別DNA模板上的堿基序列。這一過程依賴于堿基互補配對原則,即腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)配對,鳥嘌呤(G)與胞嘧啶(C)配對。DNA聚合酶通過其活性位點旁邊的模板來確定需要添加的互補dNTP。2.**dNTP結(jié)合**:DNA聚合酶的手指區(qū)負(fù)責(zé)結(jié)合dNTPs。當(dāng)dNTP與模板上的堿基配對時,DNA聚合酶的手掌區(qū),也就是活性區(qū)域,會結(jié)合一個或兩個二價金屬離子(通常是鎂離子),幫助dNTP定位并準(zhǔn)備進行化學(xué)反應(yīng)。3.**催化反應(yīng)**:DNA聚合酶通過其活性位點催化dNTP與引物3'-OH端的連接,形成新的磷酸二酯鍵。在這個過程中,dNTP失去一個磷酸基團(形成焦磷酸),這個焦磷酸分子水解,為DNA聚合酶繼續(xù)工作提供了能量。4.**校對功能**:某些DNA聚合酶(如DNA聚合酶I)具有校對功能,可以偵查、移除并改正錯誤,從而生產(chǎn)出一條無誤的新DNA鏈。這種校對功能是通過識別并去除不匹配的dNTPs來實現(xiàn)的。吉林CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達技術(shù)服務(wù)開發(fā)