ProbeOne-StepqRT-PCRKit是一種一步法反轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR(qRT-PCR)試劑盒,它整合了反轉(zhuǎn)錄和PCR步驟,簡化了操作流程。除了用于qRT-PCR,這種試劑盒還可以應(yīng)用于多種分子生物學(xué)實驗,包括但不限于:1.**基因表達分析**:通過實時監(jiān)測PCR反應(yīng)過程,廣泛應(yīng)用于基因表達分析,可以準(zhǔn)確檢測和量化基因表達靶標(biāo)。2.**基因分型和基因變異分析**:用于分析單核苷酸多態(tài)性(SNP)、拷貝數(shù)變異(CNV)和其他遺傳變異。3.**病原體和微生物檢測**:以高靈敏度和高特異性檢測細菌和病毒靶標(biāo)。4.**多重檢測**:可以在單個反應(yīng)孔中進行多重檢測,不同基因?qū)?yīng)不同探針,不同探針對應(yīng)不同熒光標(biāo)記,進行多重?zé)晒舛縋CR檢測。5.**防污染操作**:通過添加UNG酶,該試劑盒還可進行防污染操作,有效消除PCR擴增過程中帶來的產(chǎn)物污染問題。6.**RNA病毒或低表達mRNA的檢測**:由于其高靈敏度,該試劑盒適合于檢測RNA病毒或表達水平較低的mRNA。7.**cDNA合成**:在生成cDNA、進行northern印跡分析、S1核酸酶檢測、RNase保護檢測、逆轉(zhuǎn)錄PCR和差異顯示PCR之前,可以快速準(zhǔn)確測量RNA。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)withgDNAEraser是一種設(shè)計用于從RNA模板合成cDNA 鏈的試劑盒,它包含gDNAEraser以去除基因組DNA的污染,以及RNaseH-逆轉(zhuǎn)錄酶以減少RNA模板的降解。以下是該試劑盒的一些關(guān)鍵特點和應(yīng)用:1.**去除基因組DNA污染**:試劑盒中的gDNAEraser能有效去除RNA模板中的基因組DNA污染,確保后續(xù)實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.**RNaseH-逆轉(zhuǎn)錄酶**:該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性,有助于保護RNA模板不被過早降解,從而可以合成更長的cDNA鏈。3.**高溫穩(wěn)定性**:逆轉(zhuǎn)錄酶經(jīng)過基因工程改造,具有較高的熱穩(wěn)定性,可以在高溫條件下(如50°C)進行cDNA 鏈的合成,有助于打開RNA的二級結(jié)構(gòu)。4.**合成長鏈cDNA的能力**:能夠合成長達5kb甚至更長的cDNA片段,適合于需要合成全長或長片段cDNA的實驗。5.**包含所有必需組分**:試劑盒包含cDNA 鏈合成所需的所有試劑,如逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase抑制劑、隨機引物、寡聚dT引物、dNTPs、緩沖液等。6.**適用于多種RNA模板**:可以用于從總RNA或mRNA模板合成cDNA 鏈,適用于實時熒光定量RT-qPCR、3'-和5'-RACE等實驗。上海純化工藝服務(wù)技術(shù)服務(wù)臨床前研究膠原蛋白有較長的半衰期、機械強度、組裝成纖維和網(wǎng)絡(luò)的能力、生物相容性,并且可從廢棄的動物組織中獲取。
AdvanceFast1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)Plus的RNAseH-功能指的是該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性。RNaseH是一種酶,它能夠特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA部分,而不作用于單鏈或雙鏈的DNA和RNA。在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中,RNaseH活性的存在有助于控制RNA:cDNA的比例,從而在擴增效率一致的情況下,能夠更真實地反映原始mRNA中的基因豐度或表達量信息。然而,對于某些應(yīng)用,如合成長鏈cDNA,RNaseH活性可能不利,因為它可能會在全長cDNA合成完成之前降解RNA模板。因此,RNaseH-的逆轉(zhuǎn)錄酶可以用于合成多拷貝的cDNA,但可能會導(dǎo)致模板基因表達量的失真。AdvanceFast1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)Plus通過使用RNaseH-的逆轉(zhuǎn)錄酶,有助于提高長鏈cDNA的合成效率,尤其是在合成超過6kb的cDNA時。此外,該試劑盒還提供了gDNADigesterMix,用于去除RNA模板中殘留的基因組DNA污染,保證后續(xù)實驗結(jié)果的可靠性。它還提供了RandomPrimersN6和Oligo(dT)18兩種cDNA合成引物,用戶可以根據(jù)需要選擇使用,以滿足不同的實驗需求。合成的單鏈cDNA產(chǎn)物可以直接用于后續(xù)的PCR或qPCR反應(yīng)。
江畢赤酵母表達VLP技術(shù)服務(wù)涵蓋了多個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。首先是基因工程的操作,科研人員將目標(biāo)病毒的相關(guān)基因片段導(dǎo)入江畢赤酵母細胞中,通過精確的調(diào)控,使酵母細胞能夠按照預(yù)定的程序表達出病毒蛋白。這些病毒蛋白在細胞內(nèi)會自發(fā)地組裝成VLP,形成類似于天然病毒的結(jié)構(gòu)。隨后,需要進行一系列的分離和純化步驟,以去除雜質(zhì)和未組裝的蛋白,獲得高純度的VLP產(chǎn)品。在這個過程中,先進的生物技術(shù)手段和精密的儀器設(shè)備發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,確保了VLP的質(zhì)量和活性。膠原蛋白是脊椎動物的主要結(jié)構(gòu)蛋白。它在為細胞提供支撐支架方面起著至關(guān)重要的作用,從而影響細胞的存活。
要確保使用Poly(A)PolymeraseTailingKit時的實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,可以遵循以下步驟和建議:1.**反應(yīng)條件的優(yōu)化**:Poly(A)尾的長度可以通過調(diào)整RNA3'-OH末端的摩爾濃度、反應(yīng)時間、酶量和ATP濃度來控制。在37°C孵育60分鐘,加Poly(A)尾長度可以超過150個堿基。2.**使用無核酸酶的水和試劑**:確保使用的水和所有試劑都是無核酸酶的,以避免RNA降解。3.**RNA質(zhì)量和純度**:檢查RNA的質(zhì)量和純度,確保沒有DNA污染??梢允褂萌鏡NaseInhibitor來防止RNA降解。4.**終止反應(yīng)**:可以通過多種方式終止Poly(A)加尾反應(yīng),例如立即將完成的反應(yīng)置于-20°C或-80°C條件下冷凍,通過有機溶劑萃取去除Poly(A)Polymerase或使用EDTA等試劑螯合Mg2+以抑制酶活性。5.**避免熱變性**:不推薦對Poly(A)Polymerase進行熱變性以終止反應(yīng),因為這樣可能會導(dǎo)致RNA降解。6.**純化加尾的RNA**:如果需要在體外或體內(nèi)進行翻譯,可以預(yù)先通過苯酚/氯仿抽提及乙醇或醋酸銨沉淀,或柱純化已經(jīng)添加了Poly(A)尾的RNA。7.**電泳鑒定**:通過變性瓊脂糖-甲醛凝膠電泳來鑒定Poly(A)加尾產(chǎn)物。使用厚度為0.75mm(或更薄)的凝膠以獲得比較好的分辨率。
畢赤酵母能夠進行適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)折疊和分泌,其內(nèi)源性分泌蛋白的產(chǎn)量有限,使得重組蛋白的純化過程相對簡單 。遼寧HPV疫苗開發(fā)服務(wù)技術(shù)服務(wù)開發(fā)
熱敏感性雙鏈脫氧核糖核酸酶(ThermolabiledsDNase)是一種用于快速、安全地去除RNA樣品中基因組DNA污染的重組表達的酶。以下是其主要特點和應(yīng)用:1.**dsDNA特異性**:ThermolabiledsDNase能夠特異性剪切雙鏈DNA中的磷酸二酯鍵,產(chǎn)生帶有5’-磷酸與3’-羥基末端的寡核苷酸,而對單鏈DNA(如cDNA)和RNA幾乎無酶切活性。在鎂離子存在的情況下,對dsDNA的酶切活性比對ssDNA的酶切活性高約5000倍。2.**熱不穩(wěn)定性**:該酶在55℃加熱5分鐘即可被不可逆地失活,這使得它非常適合在反轉(zhuǎn)錄之前快速去除RNA樣品中的基因組DNA污染。3.**活性強**:ThermolabiledsDNase在20-40℃保持高活性狀態(tài),比牛DNaseI的活力約高30倍。2分鐘孵育即可將RNA樣品中所含有的基因組DNA或1μg基因組DNA消化完畢。4.**用途**:主要用于制備不含DNA的RNA樣品;在反轉(zhuǎn)錄前去除RNA樣品中的基因組DNA污染;以及在體外T3、T7、SP6等RNAPolymerases催化的RNA合成后消化去除模板DNA。5.**來源**:通過_Pichiapastoris_重組表達ThermolabiledsDNase基因。6.**分子量**:43kDa。7.**純度**:不含其他DNA內(nèi)切酶與外切酶活性,不含RNA酶活性。遼寧HPV疫苗開發(fā)服務(wù)技術(shù)服務(wù)開發(fā)