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PCR熒光探針法

來源: 發(fā)布時間:2023-08-22

PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)的作用下,由一對特異性引物經(jīng)熱變性-退火-延伸反應(yīng),三個不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴(kuò)增到多量的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。在反應(yīng)體系內(nèi),以一對人工合成的寡核苷酸作為擴(kuò)增引物,第一步,模板DNA變性,以構(gòu)成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物,目的基因作為模板,在DNA聚合酶的作用下模板DNA經(jīng)過80-90℃高溫變性,使模板DNA雙鏈經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步,模板DNA與引物退火(復(fù)性),模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃,引物與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對。第三步,引物的延伸,DNA模板-引物結(jié)合物在DNA聚合酶作用下,70-75℃以dNTP為反應(yīng)原料半保留復(fù)制合成一條新的模板DNA鏈。這三個步驟為一個循環(huán),2-4分鐘即可完成一個循環(huán),2-3小時就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復(fù)制到幾百萬倍,從而實現(xiàn)對靶DNA的放大。由于擴(kuò)增堿基序列按照靶DNA復(fù)制,因此PCR反應(yīng)具有高度特異性。巧亦捷核酸一體機(jī)靈敏度高,可以做到早期診斷,實現(xiàn)及時診療,減少患病動物痛苦,獲得更好的療效。PCR熒光探針法

PCR熒光探針法,PCR

市面上現(xiàn)有PCR儀器都有以下幾個弊端:1.由于PCR靈敏度極高,實際應(yīng)用中污染較嚴(yán)重,一旦有少量外源性污染就可出現(xiàn)假陽性結(jié)果。2.條件控制不當(dāng)會造成各種產(chǎn)物突變,從而降低特異性和靈敏度。3.PCR技術(shù)需要以已知DNA模板作為擴(kuò)充模板,必須知道引物的結(jié)合部位序列才能合成特異性引物,局限性較大。巧亦捷核酸一體機(jī)采用薄膜微流控技術(shù),檢測過程為全封閉且自動進(jìn)行核酸提取及PCR擴(kuò)增,無需高標(biāo)準(zhǔn)的檢測環(huán)境,可很大程度上降低污染。結(jié)果快速、準(zhǔn)確且穩(wěn)定。PCR熒光探針法巧亦捷核酸檢測一體機(jī)可以為寵物PCR檢測提供嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臏?zhǔn)確結(jié)果,為檢測人員提供信心保證。

PCR熒光探針法,PCR

現(xiàn)如今,大多數(shù)寵物醫(yī)院還是使用膠體金方法對寵物疾病病原體進(jìn)行檢測,而此種檢測方法準(zhǔn)確性低,靈敏度不高,通常出現(xiàn)檢測結(jié)果不準(zhǔn)確而導(dǎo)致寵物誤診。如果是誤診,寵物則無法得到很好的診療,甚至?xí)劳?。巧亦捷在寵物病原體核酸檢測試劑系列中應(yīng)用了PCR-熒光探針法,在PCR反應(yīng)體系中加入特異的熒光探針,在實驗條件下對寵物病原體特異性基因片段進(jìn)行擴(kuò)增,根據(jù)熒光強(qiáng)度的變化進(jìn)行檢測,并針對各種樣品進(jìn)行了反應(yīng)體系的優(yōu)化,靈敏度可達(dá)1000個拷貝,具防污染功能,特別適合在寵物醫(yī)院使用。本產(chǎn)品操作簡便,簡單培訓(xùn)即可掌握操作方法。

目前市面上有很多PCR儀器,一時間讓獸醫(yī)師無從選擇,但大多數(shù)都是PCR擴(kuò)增儀,即需要人工進(jìn)行核酸提取和純化。他們都有以下痛點(diǎn):1、核酸提取和純化的操作麻煩并且需要專業(yè)的技術(shù)人員和場地,有些還需要配置高速離心機(jī),人工核酸提取需要30~40分鐘并容易導(dǎo)致污染。2、人工反復(fù)開蓋加入或倒出試劑,容易導(dǎo)致人為和氣溶膠污染,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。因此針對寵物醫(yī)院來說,需要一臺集核酸提取、純化和擴(kuò)增為一體的全自動核酸檢測儀。能更好的控制人工成本及試劑成本。傳染病是由某些具有致病性的微生物,如細(xì)菌、病毒等引起的,能夠在某種動物或多種動物之間傳播的一些疾病。

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巧亦捷核酸一體機(jī)采用的探針法熒光PCR與常規(guī)PCR的不同之處在于:在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針(探針本身具有熒光標(biāo)記),該探針根據(jù)需要擴(kuò)增的靶序列設(shè)計因此只能與待檢測序列結(jié)合,與染料法相比提高了實驗的特異性。目前市場上的探針主要種類有:TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等,其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu):長度與普通PCR引物類似,大約20bp左右。在5’與3’端各標(biāo)記有一個熒光基團(tuán),5’的熒光基團(tuán)稱為報告基團(tuán)(Report),3’的熒光基團(tuán)稱為淬滅基團(tuán)(Quencher)。TaqMan探針的性能:在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長激發(fā)報告基團(tuán),由于報告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)的空間位置很近,因此報告基團(tuán)能夠通過FRET(FluorescenceResonanceEnergyTransfer)將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團(tuán),使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量,而報告基團(tuán)并不發(fā)射特定波長的熒光信號。PCR在常見傳染病、**、遺傳病、寄生蟲病、優(yōu)生優(yōu)育、法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中有相當(dāng)高的實際應(yīng)用價值。蘇州熒光PCR儀器

巧亦捷希望能更好的去為每一只動物提供專業(yè)的檢測服務(wù)。PCR熒光探針法

美國批發(fā)產(chǎn)業(yè)與中國有所不同,和美國相比,中國的產(chǎn)業(yè)仍處于初創(chuàng)期。在經(jīng)濟(jì)新常態(tài)下,中國大批發(fā)產(chǎn)業(yè)憑借獨(dú)特資源和市場優(yōu)勢,一舉成為資本角逐的重點(diǎn)領(lǐng)域之一。有關(guān)機(jī)構(gòu)預(yù)測,中國批發(fā)產(chǎn)業(yè)規(guī)模未來5年年均復(fù)合增長率約為27.26%。國外的谷歌、蘋果等公司,國內(nèi)的阿里巴巴、騰訊、萬科、保利、平安人壽、萬達(dá)等企業(yè)都根據(jù)自身優(yōu)勢扎根大健康領(lǐng)域。拋開生產(chǎn)型的公共服務(wù)屬性,在市場環(huán)境中,企業(yè)競爭的秘訣是要創(chuàng)造稀缺,結(jié)合消費(fèi)者高、中、低不同等級的需求,并成為難以替代的產(chǎn)品。醫(yī)藥健康上下游未整體規(guī)劃,醫(yī)用物流公司十分分散,許多下游需求店鋪及用戶因物流體系不完善而放棄該種醫(yī)藥的引入和使用。由于醫(yī)用藥保存條件要求十分高,存儲倉庫與冷藏運(yùn)輸車等的建設(shè)與運(yùn)行成本便居高不下,使得醫(yī)藥冷鏈物流從建設(shè)到運(yùn)營中的成本都遠(yuǎn)超于傳統(tǒng)物流成本。首先,完善促進(jìn)薄膜微流控核酸檢測一體機(jī),動物核酸診斷試劑,薄化學(xué)發(fā)光免疫分析一體機(jī),貓呼吸道5聯(lián)檢發(fā)展的相關(guān)政策,優(yōu)化產(chǎn)業(yè)發(fā)展環(huán)境。第二,加大對大健康前沿領(lǐng)域支持,技術(shù)帶領(lǐng)健康科技發(fā)展。第三,消滅體制機(jī)制障礙,催生更多薄膜微流控核酸檢測一體機(jī),動物核酸診斷試劑,薄化學(xué)發(fā)光免疫分析一體機(jī),貓呼吸道5聯(lián)檢發(fā)展模式。第四,大力發(fā)展與薄膜微流控核酸檢測一體機(jī),動物核酸診斷試劑,薄化學(xué)發(fā)光免疫分析一體機(jī),貓呼吸道5聯(lián)檢相適應(yīng)的高等教育事業(yè)。PCR熒光探針法

蘇州翊創(chuàng)生物科技有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念,先進(jìn)的管理經(jīng)驗,在發(fā)展過程中不斷完善自己,要求自己,不斷創(chuàng)新,時刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,在江蘇省等地區(qū)的醫(yī)藥健康中匯聚了大量的人脈以及**,在業(yè)界也收獲了很多良好的評價,這些都源自于自身的努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果,這些評價對我們而言是比較好的前進(jìn)動力,也促使我們在以后的道路上保持奮發(fā)圖強(qiáng)、一往無前的進(jìn)取創(chuàng)新精神,努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個新高度,在全體員工共同努力之下,全力拼搏將共同蘇州翊創(chuàng)生物科技供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來,創(chuàng)造更有價值的產(chǎn)品,我們將以更好的狀態(tài),更認(rèn)真的態(tài)度,更飽滿的精力去創(chuàng)造,去拼搏,去努力,讓我們一起更好更快的成長!