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樣本處理、核酸提取、PCR擴(kuò)增和數(shù)據(jù)處理是PCR的四個(gè)步驟。其中核酸提取可以幫助研究人員準(zhǔn)確地快速地分離細(xì)胞或分子材料中的有效核酸,并獲得足夠的樣本為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。無論是病毒、細(xì)菌還是體細(xì)胞,遺傳物質(zhì)都不是裸露在細(xì)胞外,都是在細(xì)胞內(nèi)。需要有一個(gè)核酸提取試劑將遺傳物質(zhì)釋放到外界,保證PCR反應(yīng)效率。將核酸釋放出來后,提取與純化過程中同樣需要將樣本中的一些PCR抑制物去除掉,獲得純度比較高的核酸,比較大限度的保證PCR反應(yīng)中抑制物的濃度降低,提高核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性。因此核酸提取與純化這一步,也是保證PCR反應(yīng)結(jié)果的關(guān)鍵一步。巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)采用磁珠法提取,效率高且可確保結(jié)果更準(zhǔn)確。PCR技術(shù)又可以分為定量PCR和常規(guī)PCR,定量PCR分為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)和數(shù)字PCR。江蘇PCR擴(kuò)增
PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)的作用下,由一對(duì)特異性引物經(jīng)熱變性-退火-延伸反應(yīng),三個(gè)不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴(kuò)增到多量的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。在反應(yīng)體系內(nèi),以一對(duì)人工合成的寡核苷酸作為擴(kuò)增引物,第一步,模板DNA變性,以構(gòu)成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物,目的基因作為模板,在DNA聚合酶的作用下模板DNA經(jīng)過80-90℃高溫變性,使模板DNA雙鏈經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步,模板DNA與引物退火(復(fù)性),模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃,引物與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對(duì)。第三步,引物的延伸,DNA模板-引物結(jié)合物在DNA聚合酶作用下,70-75℃以dNTP為反應(yīng)原料半保留復(fù)制合成一條新的模板DNA鏈。這三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán),2-4分鐘即可完成一個(gè)循環(huán),2-3小時(shí)就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復(fù)制到幾百萬(wàn)倍,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶DNA的放大。由于擴(kuò)增堿基序列按照靶DNA復(fù)制,因此PCR反應(yīng)具有高度特異性。江蘇寵物用PCR儀器生產(chǎn)企業(yè)常用的qPCR方法有熒光染料法(SYBR Green I)和探針法(TaqMan)。
巧亦捷在今年上半年推出的全自動(dòng)薄膜微流控快速核酸檢測(cè)一體機(jī)是收益診斷領(lǐng)域市面上為數(shù)不多的全自動(dòng)核酸檢測(cè)儀器,它可以自動(dòng)完成繁瑣的核酸提取和PCR擴(kuò)增部分。且檢測(cè)全程為全封閉,避免人為干擾,消除人和實(shí)驗(yàn)室的污染,降低對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的高要求。真正做到了“樣本經(jīng),結(jié)果出”,巧亦捷希望憑借薄膜微流控平臺(tái),進(jìn)一步促進(jìn)動(dòng)物檢測(cè)和診斷的水平,提升系統(tǒng)完善的寵物疾病檢測(cè)綜合解決方案,在推動(dòng)全自動(dòng)分子診斷平臺(tái)在寵物醫(yī)院應(yīng)用的同時(shí),不斷研發(fā)更多更好的動(dòng)物創(chuàng)新診斷技術(shù)和產(chǎn)品,為動(dòng)物健康提供堅(jiān)實(shí)保障。
在現(xiàn)代畜牧業(yè)和寵物醫(yī)療中,確保動(dòng)物的健康已成為一項(xiàng)至關(guān)重要的任務(wù)。隨著動(dòng)物養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大和寵物數(shù)量的增加,疾病預(yù)防和早期診斷顯得尤為重要。巧亦捷全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)的問世,為動(dòng)物健康管理樹立了新的標(biāo)準(zhǔn),為獸醫(yī)和養(yǎng)殖戶提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持。巧亦捷全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)采用先進(jìn)的薄膜微流控技術(shù),通過集成化的微流控芯片,實(shí)現(xiàn)了樣本處理、核酸提取、PCR擴(kuò)增和檢測(cè)分析的全自動(dòng)化。這一突破性的技術(shù)革新,不僅提高了檢測(cè)的精確性和靈敏度,還明顯縮短了檢測(cè)時(shí)間,使得快速診斷成為可能。在寵物醫(yī)療方面,巧亦捷核酸檢測(cè)系統(tǒng)可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)寵物體內(nèi)的病原體核酸,幫助獸醫(yī)在早期階段識(shí)別疾病。這對(duì)于一些傳染性強(qiáng)、危害大的疾病尤為重要,如犬瘟熱病毒、貓免疫缺陷病毒等。早期發(fā)現(xiàn)意味著可以及時(shí)采取措施,防止疾病擴(kuò)散,減少寵物的痛苦和診療費(fèi)用。對(duì)于畜牧養(yǎng)殖業(yè),巧亦捷系統(tǒng)同樣具有重大意義。畜禽養(yǎng)殖過程中,**的爆發(fā)往往會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。巧亦捷核酸檢測(cè)系統(tǒng)能夠?qū)ΤR姷酿B(yǎng)殖動(dòng)物病原體進(jìn)行高效篩查,如豬瘟、禽流感等。通過定期檢測(cè),養(yǎng)殖戶可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的健康威脅,采取相應(yīng)的防控措施,確保養(yǎng)殖場(chǎng)的健康和安全。PCR技術(shù)可以為動(dòng)物健康和生命科學(xué)研究提供更加強(qiáng)大的工具和技術(shù)支持。
大多數(shù)寵物醫(yī)院運(yùn)用的診斷方法為:PCR和試紙條。其區(qū)別是:試紙條原理是基于抗體抗原的免疫學(xué)方法,通過顏色或熒光標(biāo)記來判讀,和PCR檢測(cè)是基于不同方法學(xué)的檢測(cè)方式。PCR通過檢測(cè)樣本中有無病毒DNA(RNA)來確診,靈敏度高、特異性強(qiáng)、支持檢測(cè)項(xiàng)目多,是人醫(yī)醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的診斷金標(biāo)準(zhǔn),兩者區(qū)別可以理解為滴血認(rèn)親(免疫學(xué)方法)與親子鑒定(分子診斷)的區(qū)別。目前專業(yè)的的寵物疾病機(jī)構(gòu)就是使用PCR檢測(cè)。巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)采用國(guó)際**的薄膜微流控技術(shù),實(shí)現(xiàn)了從核酸提取、PCR擴(kuò)增、熒光檢測(cè)全流程自動(dòng)化芯片內(nèi)完成,可以實(shí)現(xiàn)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的核酸檢測(cè),且檢測(cè)時(shí)間短,全程無需專業(yè)技術(shù)人員參與,可實(shí)現(xiàn)基于病癥的多項(xiàng)目聯(lián)檢,更適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場(chǎng)等現(xiàn)場(chǎng)快檢應(yīng)用場(chǎng)景。國(guó)外已將PCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于犬瘟、犬細(xì)小、弓形蟲等致病菌的檢測(cè),從根本上突破了免疫學(xué)間接檢測(cè)的局限。江蘇薄膜微流控PCR動(dòng)物檢疫
巧亦捷的品牌主張為:用心關(guān)愛每一個(gè)生命健康。江蘇PCR擴(kuò)增
巧亦捷核酸一體機(jī)采用的TaqMan探針法介紹:TaqMan探針法是具有高度特異性的定量PCR技術(shù)。它的工作原理是在PCR反應(yīng)體系中存在一對(duì)PCR引物和一條探針,探針的5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán),3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán),探針只與模板特異結(jié)合,其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。當(dāng)探針完整的時(shí)候,報(bào)告基團(tuán)的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收,所以儀器搜集不到信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)展,Taq酶遇到探針,利用3′→5′外切核酸酶的活性把探針切斷,導(dǎo)致報(bào)告基團(tuán)的熒光能量不能被淬滅基團(tuán)吸收,產(chǎn)生了熒光信號(hào),因此信號(hào)的強(qiáng)度就代、表了模板DNA的拷貝數(shù)。江蘇PCR擴(kuò)增