1、對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。
2、對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。
3、即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。 PEI轉(zhuǎn)染試劑會不會產(chǎn)生毒性?低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案
隨后,開拓了在病理(組織研究)應用產(chǎn)品,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中;開發(fā)染料和染色劑,以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與government合作,開發(fā)了用于診斷試劑盒應的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠,用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應用,并不斷開發(fā)和增強其性能。近期業(yè)務擴展到電子產(chǎn)品,Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術應用中測量精度。公司秉承為應用而研發(fā),目前已擁有超過3000種產(chǎn)品。上海曼博生物為Polysciences官方授權du jia代理商,更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢!CHO細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個品牌好Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑不含動物源成分。
注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!
化學轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學研究中常用的轉(zhuǎn)染方法,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。一方面使復合體整體帶上正電荷(多數(shù)細胞膜表面帶有弱的負電荷,通過電荷作用吸引復合體到細胞膜表面);另一方面對線性的核酸進行濃縮,使其體積變小更易穿透細胞膜。陽離子聚合物類轉(zhuǎn)染試劑可以說是貧窮實驗室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發(fā)表了PEI作為轉(zhuǎn)染試劑的詳細方法,到現(xiàn)在被越來越多的實驗室采用。更多關于Polysciences PEI相關產(chǎn)品內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!如何辨別假的PEI轉(zhuǎn)染試劑。
對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。.PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品,每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴格的檢測,保證每批產(chǎn)品都100%合格、穩(wěn)定且品質(zhì)高,但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法,PH,水純度,稱量的準度,dnaRNA純度,細胞狀態(tài),細胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度,分子量及重量缺失破損等相關投訴,針對極個別客戶溶解問題和轉(zhuǎn)染效率問題我們能友善解決。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉(zhuǎn)染對復合物孵化的時間是有要求的,一般建議5-20分鐘之間。PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑使用說明
哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好?低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案
接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019-02-15,位于自由貿(mào)易試驗區(qū)達爾文路16幢104室,公司自成立以來通過規(guī)范化運營和高質(zhì)量服務,贏得了客戶及社會的一致認可和好評。本公司主要從事血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機領域內(nèi)的血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機等產(chǎn)品的研究開發(fā)。擁有一支研發(fā)能力強、成果豐碩的技術隊伍。公司先后與行業(yè)上游與下游企業(yè)建立了長期合作的關系。PL Bioscienc,Quan-Lab,Polysciences,Sirion Biote,CN-Bio,Dharmacon,Horizon,Pfenex,Visual Prote致力于開拓國內(nèi)市場,與醫(yī)藥健康行業(yè)內(nèi)企業(yè)建立長期穩(wěn)定的伙伴關系,公司以產(chǎn)品質(zhì)量及良好的售后服務,獲得客戶及業(yè)內(nèi)的一致好評。我們本著客戶滿意的原則為客戶提供血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機產(chǎn)品售前服務,為客戶提供周到的售后服務。價格低廉優(yōu)惠,服務周到,歡迎您的來電!