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山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝無批次差異

來源: 發(fā)布時間:2023-12-27

PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。多年以來,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明,在HEK293、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強。PEIMAX是一種非GMP等級PEI轉(zhuǎn)染試劑,適用于基礎科學研究及藥物研發(fā)早期階段。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種即用型線性聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染試劑(PEI)衍生物。由PEIMAX配置而成的即用型無菌試劑,采用0.1μmPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgene用于cGMP生產(chǎn)。如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀什么原因?山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝無批次差異

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接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。關于轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!可直接使用PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝23966-1和24765-1的PEI轉(zhuǎn)染試劑在哪里買?

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瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。請自行確定檢測時間。更多關于Polysciences PEI相關內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!

PEIMAX粉末配置方法:1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中;2)放入攪拌轉(zhuǎn)子,放置于磁力攪拌器上,設置攪拌程序以形成一個較小的漩渦;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分鐘左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超過7.1,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1;6)將溶液轉(zhuǎn)移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液;8)按需分裝,4°C儲存(切記不可冷凍);注:未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中,并且保存在4℃的轉(zhuǎn)染試劑將可在6個月之內(nèi)保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長有效使用期至1年。如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!PEI轉(zhuǎn)染試劑對復合物孵化的時間是有要求的,一般建議5~20分鐘之間.

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線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點:優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞,轉(zhuǎn)染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關的產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關注我們的公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!PEI試用裝在哪里可以申請?GMPPEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適用于Hela細胞轉(zhuǎn)染

美國Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣?山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝無批次差異

接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝無批次差異