對(duì)于某些類(lèi)型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。Polysciences 是一家化學(xué)品制造公司,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個(gè)科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級(jí)樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,查看更多技術(shù)文章!若想申請(qǐng)PEI試用裝,可在后臺(tái)回復(fù)“PEI申請(qǐng)” 提交需求!用PEI轉(zhuǎn)染時(shí),一般和DNA的比例會(huì)是多少?科研級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲(chǔ)存
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化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的轉(zhuǎn)染方法,主要包括兩類(lèi):陽(yáng)離子脂質(zhì)體和陽(yáng)離子聚合物。其基本原理是利用陽(yáng)離子的化學(xué)分子與帶有負(fù)電荷的核酸通過(guò)正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。一方面使復(fù)合體整體帶上正電荷(多數(shù)細(xì)胞膜表面帶有弱的負(fù)電荷,通過(guò)電荷作用吸引復(fù)合體到細(xì)胞膜表面);另一方面對(duì)線(xiàn)性的核酸進(jìn)行濃縮,使其體積變小更易穿透細(xì)胞膜。陽(yáng)離子聚合物類(lèi)轉(zhuǎn)染試劑可以說(shuō)是貧窮實(shí)驗(yàn)室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發(fā)表了PEI作為轉(zhuǎn)染試劑的詳細(xì)方法,到現(xiàn)在被越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室采用。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品內(nèi)容歡迎咨詢(xún)上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-Bio
Polysciences 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔二個(gè)碳原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體(proton sponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明,分子量為25000的線(xiàn)性PEI即Polysciences 23966(PEI 25K)轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良。如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!哪個(gè)公司有賣(mài)GMP等級(jí)的PEI轉(zhuǎn)染試劑?
注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。近期還有PEIfree申請(qǐng)活動(dòng),歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)Mine-bio,回復(fù)“PEI轉(zhuǎn)染試劑”即可領(lǐng)?。∈褂肞EI轉(zhuǎn)染時(shí),一般和DNA的比例是多少?Thermo FisherPEI轉(zhuǎn)染試劑中國(guó)代理權(quán)
PEI轉(zhuǎn)染試劑會(huì)有毒性嗎?科研級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲(chǔ)存
抗體藥物研發(fā)客戶(hù)提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級(jí)的無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無(wú)縫轉(zhuǎn)化;以及提供藥物開(kāi)發(fā)和探索的抗體文庫(kù)定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細(xì)胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國(guó)內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù),分享研發(fā)工具進(jìn)步帶來(lái)的技術(shù)紅利,終為細(xì)胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個(gè)生命科學(xué)行業(yè)賦能!若想咨詢(xún)更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)信息,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!也歡迎關(guān)注公眾號(hào)Mine-bio回復(fù)“PEI申請(qǐng)”申請(qǐng)?jiān)囉醚b!科研級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲(chǔ)存