這些小鼠在 2 至 3 個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)低血糖，胰島素陽性細(xì)胞大量擴(kuò)增。這種體內(nèi)擴(kuò)增有助于維持大量增殖的胰島素細(xì)胞，并允許定義允許的培養(yǎng)條件，在這種條件下，可以在體外建立永生化細(xì)胞系。Human Cell Design（HCD）開發(fā)了一種用于在人類胎兒組織中使用靶向Zhong liu產(chǎn)生功能的人類β細(xì)胞系。在胰島素啟動(dòng)子的控制下，用表達(dá) SV40LT 的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)人類胎兒胰腺芽。Human Cell Design 開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細(xì)胞系生產(chǎn)方法。首先，將每個(gè)轉(zhuǎn)導(dǎo)的人類胎兒胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的腎被膜下，因?yàn)樵摬课皇侨祟愐认侔l(fā)育的允許部位。在 6 到 8 個(gè)月內(nèi)，所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤，這導(dǎo)致它們的血糖水平下降。與其他胰腺移植相比，原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離，用在大鼠胰島素啟動(dòng)子控制下表達(dá) hTERT 的慢病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，并移植到其他 SCID 小鼠中。全世界有超過 5 億成年人患有糖尿病，糖尿病細(xì)胞模型可用于研究胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞功能、糖尿病機(jī)制和研究策略。糖尿病糖尿病細(xì)胞模型RNA測序驗(yàn)證胰島細(xì)胞基因表達(dá)

Human Cell Design 成立于 2001 年，總部位于法國，專注于人源細(xì)胞模型開發(fā)，以助力科研和生物醫(yī)藥企業(yè)的發(fā)展。其中可作為糖尿病細(xì)胞模型的 EndoC-BH5、EndoC-BH3、EndoC-BH1 等人源胰島 B 細(xì)胞為其優(yōu)勢產(chǎn)品，這些人源胰島 B 細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的胰島素接近于天然胰島細(xì)胞分泌的胰島素量。人源胰島 B 細(xì)胞模型構(gòu)建技術(shù)性文章早期發(fā)表于 2011 年，相關(guān)文章總引用量達(dá)到 600+，人源胰島 B 細(xì)胞模型已經(jīng)被全球 200 多家生物醫(yī)藥和生命科研機(jī)構(gòu)作為糖尿病細(xì)胞模型使用。人源胰島B細(xì)胞糖尿病細(xì)胞模型細(xì)胞活力好糖尿病細(xì)胞模型——即用型 EndoC-BH5 細(xì)胞是第三代永生化人類胰腺 B 細(xì)胞系。

EndoC-βH5,GLTxEndoC-βH5,HLA-A2EndoC-βH5等細(xì)胞可在體外在葡萄糖劑量刺激下產(chǎn)生正常的胰島素分泌反應(yīng)，對(duì)GLP-1R/GLP-1等胰島素刺激因子產(chǎn)生正常響應(yīng)，可以響應(yīng)細(xì)胞因子刺激，表達(dá)HLA-A2等T細(xì)胞受體，因此可用于糖尿病炎癥相關(guān)等多種藥物開發(fā)實(shí)驗(yàn)。EndoC-BH5細(xì)胞可批量穩(wěn)定生產(chǎn)，因此可以進(jìn)行基于siRNA的高通量篩選研究中，用于鑒定出潛在的2型糖尿病藥物靶點(diǎn)。另外，Humancelldesign根據(jù)法國生物倫理立法收集人類胎兒組織，獲得法國生物醫(yī)學(xué)局（巴黎）的批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)為PFS08-005。

在胰島細(xì)胞刺激中，基礎(chǔ)和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數(shù)為11.6±1.8。通過應(yīng)用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導(dǎo)的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM)，驗(yàn)證了胰島素分泌對(duì)D-葡萄糖的特異性。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加，從0mMD-葡萄糖時(shí)的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時(shí)的679.2±39.5ng/h/10⁶細(xì)胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖，分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/10⁶細(xì)胞。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細(xì)胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良，獲得的功能胰腺B細(xì)胞，無限接近天然人源胰島B細(xì)胞，其胰島素分泌功能與天然細(xì)胞類似，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗(yàn)證的細(xì)胞均一性達(dá)到90%以上（左圖），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)（右圖），對(duì)GLP-1R激動(dòng)劑， Exendin4刺激產(chǎn)生明細(xì)那反饋， 且可實(shí)現(xiàn)批量化生成，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。糖尿病細(xì)胞模型可用于類胰島構(gòu)建、糖尿病細(xì)胞模型構(gòu)建。

人原代β細(xì)胞的可用性有限，從人胰島制劑中純化β細(xì)胞具有挑戰(zhàn)性。在嚙齒類動(dòng)物中，β細(xì)胞系自20世紀(jì)70年代初以來就已經(jīng)可用，并且在研究β細(xì)胞功能方面非常有用。然而，嚙齒動(dòng)物的β細(xì)胞并不是研究人類β細(xì)胞的理想選擇，因?yàn)槿祟惡蛧X動(dòng)物的β細(xì)胞在許多方面彼此不同。例如，在嚙齒類動(dòng)物中，胰島素由2個(gè)基因編碼，而在人類中，只有1個(gè)基因編碼。嚙齒動(dòng)物和人類β細(xì)胞的功能差異是由于葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和磷酸化在葡萄糖感知中的相對(duì)作用不同。表達(dá) EndoC-BH5 的 HLA-A2 重新利用抗yan藥物或發(fā)現(xiàn) I 類抗原肽加工和呈遞的抑制劑,其細(xì)胞因子反應(yīng)與原發(fā)性類似。上海糖尿病細(xì)胞模型廠家技術(shù)指導(dǎo)

糖尿病研究中較好的胰島B細(xì)胞模型？糖尿病糖尿病細(xì)胞模型RNA測序驗(yàn)證胰島細(xì)胞基因表達(dá)

Humancelldesign（HCD）通過將永生化轉(zhuǎn)基因hTERT和SV40大T以及單純皰疹病毒-1胸苷激酶整合基因轉(zhuǎn)移至人胎兒胰腺中，產(chǎn)生EndoC-βH5細(xì)胞。擴(kuò)增后使用CRE ji huo去除永生化轉(zhuǎn)基因，并使用更昔洛韋消除剩余的未切除細(xì)胞，所得細(xì)胞作為可立即使用的EndoC-βH5細(xì)胞進(jìn)行分發(fā)。EndoC-βH5已經(jīng)成功進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組、免疫學(xué)和的功能測定。即用型EndoC-βH5細(xì)胞顯示出高效的葡萄糖依賴性胰島素分泌。歐洲四個(gè)du li實(shí)驗(yàn)室觀察并再現(xiàn)了強(qiáng)勁的10倍胰島素分泌指數(shù)。EndoC-βH5細(xì)胞響應(yīng)葡萄糖以動(dòng)態(tài)方式分泌胰島素。GLP1R和GIPR介導(dǎo)的信號(hào)增強(qiáng)葡萄糖刺激EndoC-βH5細(xì)胞的胰島素分泌。糖尿病糖尿病細(xì)胞模型RNA測序驗(yàn)證胰島細(xì)胞基因表達(dá)