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即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率

來源: 發(fā)布時間:2024-09-18

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!用PEI轉(zhuǎn)染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀?即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率

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注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“申請PEI”,即可參加活動!更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!40KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比比較高?

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瞬時轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。如想申請試用裝,請關(guān)注公眾號:Mine-bio,回復(fù)“申請PEI”,即可參加!用PEI轉(zhuǎn)染試劑時,一般和DNA的比例是多少呢?

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特別提醒1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio ,私信回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝!Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣?40KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

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抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù),分享研發(fā)工具進步帶來的技術(shù)紅利,終為細胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個生命科學(xué)行業(yè)賦能!若想咨詢更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注公眾號Mine-bio回復(fù)“PEI申請”申請試用裝!即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率