核酸提取細(xì)胞裂解方法之酶裂解。酶裂解是在處理樣本時(shí)在樣本中添加一種酶來(lái)消化蛋白質(zhì)或細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如酵母細(xì)胞壁和絲狀。優(yōu)勢(shì)：實(shí)驗(yàn)室中的理想方法，過(guò)程中無(wú)需機(jī)械裂解設(shè)備；選擇性的去除細(xì)胞壁，留下細(xì)胞部分采用另一種裂解方式（通常是化學(xué)裂解），方法靈活，避免了一些由機(jī)械裂解產(chǎn)生的破壞。劣勢(shì)：耗時(shí)較長(zhǎng)（酶消化可能需要1小時(shí)）而且消化酶的價(jià)格昂貴；其次，由于消化酶可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生變化變化，進(jìn)而可能影響基因表達(dá)，對(duì)后續(xù)的基因表達(dá)鑒定結(jié)果產(chǎn)生影響導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，因此不適合進(jìn)行基因表達(dá)分析。南京正揚(yáng)生物有自動(dòng)化核酸提取試劑盒嗎？深圳宿主細(xì)胞殘留DNA提取操作流程

采用納米磁珠法進(jìn)行核酸提取時(shí)的注意事項(xiàng)：1、裂解過(guò)程中，樣品的裂解要充分，讓核酸充分暴露出來(lái)。2、在樣本核酸含量高，裂解液可充分裂解的范圍內(nèi)，增加樣本量可以增加提取效果。3、清洗過(guò)程要控制次數(shù)，如果清洗次數(shù)過(guò)多，會(huì)增加清洗過(guò)程中的核酸損失量。一般情況下，清洗次數(shù)在2～4次比較好。4、提取的核酸如果有蛋白及（或）鹽類殘留，可在提取過(guò)程中加入蛋白酶K降解樣品中的蛋白，減少蛋白殘留污染，同時(shí)用高濃度有機(jī)溶劑對(duì)核酸進(jìn)行清洗，減少鹽殘留對(duì)酶活的抑制，從而防止雜質(zhì)對(duì)下游應(yīng)用產(chǎn)生抑制。5、在核酸提取量較低時(shí)，并不是增加磁珠用量，提取效果越好。鄭州復(fù)制型腺相關(guān)病毒核酸提取常見(jiàn)問(wèn)題磁珠法核酸提取流程。

NaCl在核酸提取中的作用是提供一個(gè)高鹽環(huán)境，使DNA充分溶解于液相。沉淀DNA時(shí)總會(huì)加入高濃度的鹽,加鹽的目的是破壞能使蛋白質(zhì)保持穩(wěn)定的兩個(gè)因素,使蛋白和DNA分離并沉淀下來(lái)。而此時(shí)鹽的陽(yáng)離子會(huì)與DNA結(jié)合形成DNA-陽(yáng)離子鹽溶于溶液中,再用無(wú)水乙醇可以將DNA-陽(yáng)離子鹽沉淀下來(lái)。提取DNA時(shí)先加0.14mol/L氯化鈉，因?yàn)樵谶@種濃度的氯化鈉溶液中，DNA的溶解度比較低，而蛋白質(zhì)的溶解度增加，這樣通過(guò)過(guò)濾能將DNA分離開(kāi)，以除去蛋白質(zhì)。再加入95%的酒精能使DNA沉淀，因?yàn)樵谶@個(gè)濃度下DNA溶解度比較低。如果直接加酒精不先加氯化鈉，DNA和蛋白質(zhì)都能被酒精所沉淀，就無(wú)法將DNA和蛋白質(zhì)分離開(kāi)。所以必須先加氯化鈉后加酒精，順序不能顛倒。

核酸提取中在細(xì)胞裂解后后往往需要進(jìn)行純化處理。純化是指在細(xì)胞裂解后，核酸被選擇性的從周圍細(xì)胞成分中釋放出來(lái)，集中在水溶液或合適的緩沖溶液中以供下有使用。細(xì)胞裂解后的步驟，統(tǒng)稱為純化。純化方法包括：離心柱提取和純化法；苯酚/氯仿和乙醇沉淀法；納米磁珠法提取法純化法。離心柱是通過(guò)特殊硅基質(zhì)吸附材料，能夠特定吸附DNA，而RNA和蛋白質(zhì)順利通過(guò)，然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸，低鹽高PH值洗脫，來(lái)分離純化核酸。苯酚/氯仿和乙醇沉淀法是通過(guò)酚/氯仿處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后，在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分，在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì)，蛋白質(zhì)位于兩相之間。納米磁珠法是運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性，在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場(chǎng)的作用下，從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。宿主細(xì)胞殘留核酸提取時(shí)，提取效果不理想的原因可能有哪些？

苯酚/氯仿和乙醇沉淀法進(jìn)行核酸提取的操作步驟：1、苯酚和氯仿的接觸：裂解的樣品與苯酚/氯仿通常通過(guò)強(qiáng)旋渦混合。旋渦確保所有有機(jī)成分都能與苯酚/氯仿混合物充分相互作用，以達(dá)到完全溶解和去除的目的。2、離心：步驟1過(guò)后可見(jiàn)兩個(gè)相。含有核酸的水相位于頂部，而底部的有機(jī)相含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和其他大分子。然后離心樣品以完全分離這兩個(gè)相。3、相分離：用移液管小心地除去水相4、乙醇沉淀：用乙醇沉淀、純化核酸。在乙醇沉淀過(guò)程中，加入鹽和乙醇以緩沖水溶液中的核酸。鹽緩沖糖磷酸骨架，乙醇改變?nèi)芤旱慕殡姵?shù)。這使得核酸能夠從水溶液中分離出來(lái)，從而可以通過(guò)高速離心分離。5、重懸：在水或TE緩沖液中重新溶解成團(tuán)的DNA或RNA。Vero細(xì)胞殘留核酸提取。深圳復(fù)制型慢病毒核酸提取常見(jiàn)問(wèn)題

支原體檢測(cè)時(shí)，為什么要做核酸提??？深圳宿主細(xì)胞殘留DNA提取操作流程

核酸提取純化的總原則是要保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性，防止降解，同時(shí)要排除其他分子的污染。因?yàn)橐患?jí)結(jié)構(gòu)是核酸分子**基本的結(jié)構(gòu)，儲(chǔ)存著全部的遺傳信息，是進(jìn)一步研究的基礎(chǔ)。為了保持核酸的完整性，在提取過(guò)程中要注意防止核酸酶對(duì)核酸的降解。還要防止化學(xué)因素（酸堿等）和物理因素（高溫或機(jī)械剪切等）引起核酸變性或破壞。制備RNA要特別注意防止核酸酶的作用，因?yàn)楹怂崦阜植己軓V，活力很高；而對(duì)DNA更重要的是防止張力剪切作用，因?yàn)镈NA分子特別長(zhǎng)，容易斷裂。對(duì)于核酸的提取純化應(yīng)達(dá)到以下三點(diǎn)要求：①核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子；②其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到比較低程度；③排除其他核酸分子的污染，如提取DNA分子時(shí)，應(yīng)去除RNA分子，反之亦然。深圳宿主細(xì)胞殘留DNA提取操作流程