引起組織壞死,從而導(dǎo)致卵巢功能早衰。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù),本發(fā)明提供了一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法。本發(fā)明根據(jù)“順鉑可誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡,引起組織壞死,從而導(dǎo)致卵巢功能早衰”這一原理,使用不同濃度及不同方法建立了化療性損傷卵巢早衰動(dòng)物模型,并對(duì)比各種方法間的優(yōu)劣性,篩選出順鉑比較好的濃度及給藥時(shí)間,為篩選順鉑導(dǎo)致的卵巢早衰動(dòng)物模型比較好劑量提供了一種操作簡(jiǎn)單,成功率高,結(jié)果可靠的實(shí)驗(yàn)方法。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法:將劑量為按體重一日2~3mg/kg的順鉑施用于大鼠,施用方式為腹腔注射,施用方法:連續(xù)施用7天,末次注射后第15天,得大鼠卵巢早衰模型?;颍簩┝繛榘大w重4~6mg/kg的順鉑施用于大鼠,施用方式為腹腔注射,施用方法:第1天、第8天施用;末次注射后第15天,得大鼠卵巢早衰模型。進(jìn)一步地,可將順鉑溶于%氯化鈉溶液配置成順鉑注射液,然后注射。所述順鉑,可市場(chǎng)常規(guī)購(gòu)買得到,比如齊魯制藥公司生產(chǎn)的順鉑。進(jìn)一步地,注射期間每天稱量大鼠體重,注射后每周稱量2次;末次注射后15天,麻醉取血檢測(cè)***水平,取卵巢檢測(cè)對(duì)比卵巢重量。能夠準(zhǔn)確模擬人相關(guān)特定功能與疾病特征。鎮(zhèn)江小鼠疾病動(dòng)物模型建模
腰椎間盤突出是造成全球大部分地區(qū)工作缺失和活動(dòng)受限的主要疾病,隨著日常生活節(jié)奏的不斷加快,腰椎間盤突出癥已經(jīng)成為臨床脊柱外科的常見(jiàn)病和多發(fā)病,而且發(fā)病人群越來(lái)越呈現(xiàn)年輕化及普遍化的趨勢(shì)。該病主要是由于腰椎長(zhǎng)期的受力不均或突然性外傷,導(dǎo)致腰椎纖維環(huán)出現(xiàn)變形、破裂,纖維環(huán)、髓核及軟骨終板單獨(dú)或同時(shí)外突,從而壓迫到坐骨神經(jīng)、神經(jīng)根或馬尾神經(jīng),患者出現(xiàn)腰部疼痛,牽連股部,下肢足部放射性疼痛,引起神經(jīng)功能、運(yùn)動(dòng)功能障礙,特定身體部位出現(xiàn)麻痹或癱瘓癥狀。良好的腰椎間盤突出動(dòng)物模型的建立,可以生動(dòng)直觀的幫助醫(yī)療工作者理解腰椎間盤突出壓迫神經(jīng)后,神經(jīng)的病理生理變化以及疾病的發(fā)***展規(guī)律,并可以通過(guò)成熟的動(dòng)物模型,探索有效的***方法。近年來(lái),隨著對(duì)腰椎間盤突出癥的認(rèn)識(shí)研究的不斷深化,人們希望通過(guò)建立一種可靠、有效的腰椎間盤突出的動(dòng)物模型,通過(guò)施加干預(yù)因素,更加準(zhǔn)確地觀察模型體內(nèi)產(chǎn)生的變化,探究人體內(nèi)疾病發(fā)生機(jī)理,并將研究成果推廣到臨床,為***腰椎間盤突出癥提供合理、有效的防治手段。因此?;窗泊笫蠹膊?dòng)物模型建模確定研究疾病目的了解影響疾病發(fā)生的內(nèi)在與外在因素。
圖2是從側(cè)面展示的壓迫元件插入椎間孔的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3是術(shù)后大鼠四肢表現(xiàn)情況。圖4是術(shù)后28天大鼠的雙下肢縮足閾值變化曲線圖。圖5是重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)大鼠背根神經(jīng)壓迫模型的影響。具體實(shí)施方式以下通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的描述。以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明,而不是限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1、模型的制備1、腹腔注射1%戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠(220-250g),背部剃毛,碘伏消毒背部皮膚,俯臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上,鋪無(wú)菌巾。2、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)作一2-3cm縱行切口,切開(kāi)皮膚,鈍性分離椎旁肌至橫突上方,暴露腰4椎間孔,腰5椎間孔(椎旁肌可用自制拉鉤保持分離狀態(tài))。3、將2根***端11為4mm,第二端12為2mm,直徑為,第二端12置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。如圖1和2所示,可以看到腰4錐體1、腰5錐體2、腰6錐體3、l型棒10、腰4神經(jīng)根4和腰5神經(jīng)根5的位置關(guān)系。當(dāng)l型棒10的***端11插入腰4錐體1的腰4椎間孔后,會(huì)對(duì)腰4神經(jīng)根4起到壓迫作用;同樣的,當(dāng)l型棒10的***端11插入腰5錐體2的腰5椎間孔后,會(huì)對(duì)腰5神經(jīng)根5起到壓迫作用。從而達(dá)到模擬腰椎間盤突出壓迫神經(jīng)根的目的,制備得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。
r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’步驟4、鑒定為pirb基因敲入的f0代雄性小鼠7周齡、雌性小鼠6周齡分別與野生型異性小鼠交配獲得f1代雜合子小鼠,圖2為本發(fā)明f1代雜合子小鼠pirb基因敲除小鼠的流程圖,小鼠出生后20天進(jìn)行pcr鑒定,若有陽(yáng)性小鼠出生,則表示轉(zhuǎn)基因已經(jīng)整合到生殖細(xì)胞。(1)通過(guò)pcr方法對(duì)獲得的f1代小鼠進(jìn)行基因型的鑒定:(a)dna的提取:方法1:采用takaraminibestuniversalgenomicdnaextractionkit()來(lái)獲得高純度的基因組dna。步驟a.每只小鼠剪下一段尾巴(2~5mm),放入離心管中,加入180μlbuffergl,20μl蛋白激酶k和10μlrnasea。步驟b.將步驟a離心管內(nèi)于56℃孵育過(guò)夜。步驟c.過(guò)夜后12000rpm離心2min去除雜質(zhì)。步驟d.加入200μlbuffergb和200μl無(wú)水乙醇,充分混勻。步驟e.將吸附柱放在收集管上,將步驟d得到的樣品加到吸附柱里,12000rpm離心2min,棄掉收集管中液體。步驟f.棄去液體后在吸附柱中加入500μlbufferwa,12000rpm離心1min,棄掉收集管中液體。步驟g.在收集管中加入700μlbufferwb,12000rpm離心1min。棄掉收集管中液體。注意:bufferwb需要與100%乙醇預(yù)混,沿管壁加入bufferwb沖走殘余的鹽。步驟h.重復(fù)步驟g一次。構(gòu)建人源移植瘤模型需要合適的免疫缺陷小鼠想知道如何選擇?
1、動(dòng)物模型名稱:環(huán)磷酰胺致白細(xì)胞減少癥小鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:KM小鼠或NIH小鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雄性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:約4周齡5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:18~22g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí),1、實(shí)驗(yàn)方法:環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)。小鼠按30mg/kg體重劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺,連續(xù)注射5d。所有小鼠在注射前、注射第3、5日,以及停止注射第2、5、8、11、15日時(shí)分別**作外周血象檢測(cè),觀察外周血白細(xì)胞總數(shù)。***1次檢測(cè)觀察后麻醉處死小鼠,取其股骨,用Hanks液沖洗骨髓細(xì)胞,顯微鏡下觀察骨髓有核細(xì)胞數(shù)。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):模型組小鼠的外周血白細(xì)胞總數(shù)明顯降低,鏡下觀察模型組小鼠的骨髓有核細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照組小鼠明顯降低。臨床上平時(shí)不易見(jiàn)到的疾病可用動(dòng)物隨時(shí)復(fù)制出來(lái)。南京哪一家疾病動(dòng)物模型建模
動(dòng)物疾病模型的另一個(gè)富有成效的用途。鎮(zhèn)江小鼠疾病動(dòng)物模型建模
人乳腺*裸鼠模型:1、實(shí)驗(yàn)方法:**細(xì)胞移植法、**組織塊移植法。a.**細(xì)胞移植:**細(xì)胞在二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)至足夠數(shù)量。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的**細(xì)胞,用0.25%胰酶消化,用不完全培養(yǎng)液配成濃度不低于1×107個(gè)/mL的細(xì)胞懸液,于小鼠乳腺脂肪墊注射0.2mL細(xì)胞懸液,注意每次注射前需混勻細(xì)胞懸液。b.**組織塊移植:**接種于動(dòng)物長(zhǎng)至1cm時(shí),取新鮮的**組織塊,在不完全培養(yǎng)液中漂洗,切取生長(zhǎng)良好、魚(yú)肉裝的瘤組織,將其剪切成約1.5mm直徑的小**塊。將動(dòng)物接種部位消毒,剪一小口,將小**塊經(jīng)這一小口接種到小鼠乳腺脂肪墊,如切口較大需要縫合切口。鎮(zhèn)江小鼠疾病動(dòng)物模型建模
上海東寰生物科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)范圍是商務(wù)服務(wù),擁有一支專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和良好的市場(chǎng)口碑。上海東寰生物致力于為客戶提供良好的原代細(xì)胞,細(xì)胞增殖與凋亡,細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,動(dòng)物疾病模型,一切以用戶需求為中心,深受廣大客戶的歡迎。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力,努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí),遵守行業(yè)規(guī)范,植根于商務(wù)服務(wù)行業(yè)的發(fā)展。上海東寰生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念,全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。