卵巢早衰(pof)是指女性40歲前以閉經(jīng)、不育、雌***缺乏及促性腺***水平升高為特征的一種疾病。一般人群中發(fā)病率為1％～3％，在繼發(fā)性閉經(jīng)婦女中占4％～8％，在20歲以前的發(fā)病率為％。近年來pof在育齡婦女中的發(fā)生率有逐年升高且向年輕化發(fā)展的趨勢(shì)，由于卵巢早衰患者卵巢分泌的雌***量減少，即可導(dǎo)致一些其他疾病，如骨質(zhì)疏松、泌尿生殖道萎縮、脂質(zhì)代謝紊亂、心血管疾病。順鉑又稱順氯氨鉑、氯氨鉑、ddp、錫鉑，是目前常用的金屬鉑類絡(luò)合物，在分子中鉑原子對(duì)其抗**作用有重要意義。但只有順式才有意義，反式無效。其可與dna鏈交叉連接，顯示出細(xì)胞毒作用。溶解后在體內(nèi)無需載體轉(zhuǎn)運(yùn)，即可通過帶電的細(xì)胞膜。由于細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度低(4mmol/l)，氯離子為水所取代，電荷呈陽性，具有類似烷化劑雙功能基團(tuán)的作用，可與細(xì)胞核內(nèi)dna的堿基結(jié)合，形成三種形式的交聯(lián)，造成dna損傷，破壞dna復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，高濃度時(shí)也抑制rna及蛋白質(zhì)的合成。順鉑具有抗*譜廣、乏氧細(xì)胞有效、作用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，已普遍用于***睪丸*、卵巢*、子宮*、膀胱*、頸部*、前列腺*、腦*等，療效***。但順鉑用于****有一定的毒性，會(huì)引起副作用，與卵巢的損害有直接關(guān)系，有研究表明順鉑可誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡。臨床上平時(shí)不易見到的疾病可用動(dòng)物隨時(shí)復(fù)制出來。楊浦區(qū)哪一家疾病動(dòng)物模型建模

    引起組織壞死，從而導(dǎo)致卵巢功能早衰。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法。本發(fā)明根據(jù)“順鉑可誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡，引起組織壞死，從而導(dǎo)致卵巢功能早衰”這一原理，使用不同濃度及不同方法建立了化療性損傷卵巢早衰動(dòng)物模型，并對(duì)比各種方法間的優(yōu)劣性，篩選出順鉑比較好的濃度及給藥時(shí)間，為篩選順鉑導(dǎo)致的卵巢早衰動(dòng)物模型比較好劑量提供了一種操作簡(jiǎn)單，成功率高，結(jié)果可靠的實(shí)驗(yàn)方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法：將劑量為按體重一日2～3mg/kg的順鉑施用于大鼠，施用方式為腹腔注射，施用方法：連續(xù)施用7天，末次注射后第15天，得大鼠卵巢早衰模型?；颍簩┝繛榘大w重4～6mg/kg的順鉑施用于大鼠，施用方式為腹腔注射，施用方法：第1天、第8天施用；末次注射后第15天，得大鼠卵巢早衰模型。進(jìn)一步地，可將順鉑溶于％氯化鈉溶液配置成順鉑注射液，然后注射。所述順鉑，可市場(chǎng)常規(guī)購(gòu)買得到，比如齊魯制藥公司生產(chǎn)的順鉑。進(jìn)一步地，注射期間每天稱量大鼠體重，注射后每周稱量2次；末次注射后15天，麻醉取血檢測(cè)***水平，取卵巢檢測(cè)對(duì)比卵巢重量。楊浦區(qū)視覺疾病動(dòng)物模型建模小鼠疾病建模請(qǐng)找上海東寰。

    該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及下游的調(diào)節(jié)機(jī)制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術(shù)方案是：pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型，包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點(diǎn)grna1和grna2，將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi)，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術(shù)方案為：pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，具體按照以下步驟實(shí)施：步驟1、基于crispr/cas9技術(shù)構(gòu)建針對(duì)c57bl/6j小鼠rosa26基因的特異性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步驟2、構(gòu)建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶載體，將打靶載體進(jìn)行線性化處理；步驟3、步驟2中將含有l(wèi)oxp位點(diǎn)打靶載體、步驟1中有活性的grna1和grna2與cas9蛋白共同注射進(jìn)入**小鼠受精卵中，獲得f0代小鼠；步驟4、將步驟3中性成熟的陽性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代，獲得f1代雜合子小鼠，通過pcr、測(cè)序和southern雜交確定動(dòng)物基因型；步驟5、將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。

1、動(dòng)物模型名稱：堿燒傷致角膜損傷大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：成年5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：160-200g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境：SPF級(jí)，1、實(shí)驗(yàn)方法：氫氧化鈉致大鼠角膜化學(xué)性損傷。大鼠用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，用干棉棒拭去結(jié)膜囊多余液體，將統(tǒng)一規(guī)格直徑3mm的圓形濾紙片浸入1mol/LNaOH溶液中20s，飽和后取出置于干燥濾紙上1秒以吸去過多的堿液，將濾紙片貼敷于大鼠右眼角膜**90s后移去，立即用滅菌水沖洗結(jié)膜囊及角膜2min。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：肉眼或裂隙燈下觀察到角膜有損傷。早期階段科學(xué)假說與疾病潛在藥物治療效果評(píng)價(jià)始于小鼠疾病模型構(gòu)建及其實(shí)驗(yàn)室研究。

    即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點(diǎn)還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動(dòng)物模型對(duì)于pirb基因功能的研究和在體驗(yàn)證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細(xì)胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機(jī)制。通過pirb敲入動(dòng)物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細(xì)胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點(diǎn)的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗(yàn)證pirb基因敲入效果的測(cè)序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的結(jié)果圖。開展小鼠疾病模型初步研究分析小鼠疾病模型研究初步結(jié)果與生物學(xué)信息資料等相關(guān)知識(shí)間的差距！品牌疾病動(dòng)物模型建模

廣泛應(yīng)用于藥效評(píng)價(jià)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。楊浦區(qū)哪一家疾病動(dòng)物模型建模

    pirb在軸突生長(zhǎng)錐表達(dá)，位于富含肌動(dòng)蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經(jīng)元突起的表達(dá)呈點(diǎn)狀分布。文獻(xiàn)表明，pirb表達(dá)隨年齡增加，特別是在老齡認(rèn)知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對(duì)海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉(zhuǎn)基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導(dǎo)幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對(duì)ad起到***效應(yīng)。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信號(hào)通路仍然未被闡明，因此迫切需要pirb的細(xì)胞和動(dòng)物模型。目前對(duì)于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制劑，或者采用慢病毒轉(zhuǎn)染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響，后者慢病毒轉(zhuǎn)染在原代細(xì)胞和在體的轉(zhuǎn)染效率比較低，使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題，我們通過crispr/cas9技術(shù)建立了pirb基因敲入小鼠，將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點(diǎn)，為研究pirb在免疫系統(tǒng)或者神經(jīng)系統(tǒng)的作用和機(jī)制提供了很好的工具。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型。楊浦區(qū)哪一家疾病動(dòng)物模型建模

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