細胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細胞固定液,室溫培養(yǎng)30分鐘,棄固定液;(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸,搖床孵育5分鐘,以中和過量的多聚甲醛;(c)棄甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細胞通透液,室溫通透10分鐘,棄細胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;該產品是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測,適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EdU后進行細胞涂片處理,固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。也可以應用于流式細胞儀檢測EdU細胞增殖檢測試劑盒的功能具體介紹。品牌EdU細胞增殖檢測試劑盒
EdU細胞增殖方法簡單,方便,無需DNA變性,能夠與各種抗體或熒光蛋白同時標記,以檢測細胞其他性狀特征。該方法無需DNA變性,無需抗原修復,無需抗原抗體反應,簡單、靈敏、快速、準確,適合各種細胞系的細胞增殖檢測,尤其適用于各種細胞系的高通量篩選實驗,如在藥物篩選中檢測加藥后細胞增殖變化。EdU方法無需DNA變性,完全適用于各種顯微成像技術,在10X,20X,40X都能得到很好的成像效果。EdU細胞增殖檢測方法不需要劇烈的DNA變性操作,只需溫和的細胞固定化和透化處理,能夠較好地保護細胞形態(tài)、DNA整體結構及細胞內抗原識別位點山東EdU細胞增殖檢測試劑盒價格EdU細胞增殖檢測試劑盒給社會帶來了什么好處?
EdU只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內更容易擴散,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。AdrianSalic特別強調:“與傳統(tǒng)的免疫熒光染色不同,EdU反應能在幾分鐘內完成,且不需要進行嚴格的樣品變性處理,使得組織成像更簡單易行?!奔毎鲋硻z測方法基于EdU與Apollo?熒光染料的完美結合準確檢測新合成的DNA,簡單,快速,準確。這種檢測方法非??焖伲抑恍韬唵蔚膸讉€步驟,因此也適用于高通量篩選試驗,如在藥物篩選中檢測加藥后細胞的活力。
EdU上的乙炔基能與生物素標記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應,形成穩(wěn)定的三唑環(huán),該反應非常迅速,被稱作點擊反應(Clickreaction),其反應原理參見圖1。通過點擊反應,新合成的DNA會被相應的生物素探針所標記,從而可以使用適當的檢測設備檢測到增殖的細胞。EdU檢測法中的點擊反應(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細胞DNA中的EdU,在銅離子的催化發(fā)生共價反應,形成穩(wěn)定的三唑環(huán),終使細胞DNA標記上生物素等探針上海東寰向您介紹EdU細胞增殖檢測試劑盒的好處。
細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。EdU(5-Ethynyl-2,-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復制的DNA分子中,EdU細胞增殖檢測試劑盒通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應,把熒光集團標記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性,廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復等方面的研究。傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復、抗原抗體過夜孵育等復雜繁瑣的操作步驟。上海東寰告訴您EdU細胞增殖檢測試劑盒如何去使用呢?品牌EdU細胞增殖檢測試劑盒說明書
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EdU標記(a)將細胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液,制成2xEdU標記培養(yǎng)基;(b)提前將2xEdU標記培養(yǎng)基預熱,然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中,獲得lxEdU溶液,其中EdU的終濃度為10uM;注:1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基,因為這樣可能會影響細胞增殖的速度;2)配置好的培養(yǎng)基建議現用現配,用量以沒過細胞為宜;(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細胞2小時,棄培養(yǎng)基;注:1)培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài);2)大多數**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次,毎次5分鐘,以除去未摻入DNA的EdU殘留。注:貼壁不牢的細胞可降低清洗強度品牌EdU細胞增殖檢測試劑盒
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