即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細(xì)胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機(jī)制。通過pirb敲入動物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細(xì)胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。疾病動物模型建模廠家。黃浦區(qū)疾病動物模型建模原理

pirb的mrna和蛋白表達(dá)水平***增加。在cns，pirb是髓鞘抑制因子nogo-a、mag、omgp的受體，參與神經(jīng)元突起芽發(fā)和生長錐塌陷，抑制神經(jīng)元軸突再生和突觸可塑性。pirb的細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(d3-d6)介導(dǎo)了pirb與nogoa的結(jié)合。近年來關(guān)于阿爾茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)研究還發(fā)現(xiàn)，pirb是aβ42寡聚體的高親和力受體，親和力達(dá)到納摩爾水平。pirb的前兩個細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(d1-d2)介導(dǎo)了aβ42寡聚體和pirb的相互作用，導(dǎo)致絲切蛋白(cofilin)信號通路****組織化學(xué)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)。非酒肝疾病動物模型建模說明書廣泛應(yīng)用于藥效評價、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。

2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升，同樣，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖3所示。表3表4②體重變化：(mean±sd)，如圖4所示：2mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第2天開始)。3mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第4天開始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg組(第1、8天注射)與空白組相比，大鼠體重分別在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg組體重在停止給藥后4天與空白組無差異。③卵巢重量：如表5、圖5所示，2mg、6mg組大鼠在經(jīng)過順鉑注射后卵巢重量相比對照組，都有不同程度縮減，其中2mg組卵巢重量明顯減輕(p＜)，4mg、6mg組無明顯差異。表5④動情周期觀察(陰道涂片)：3mg組動物死亡時間早，無完整的動情周期。如表、圖6所示。正常大鼠動情周期4-5天。分為四個階段，動情前期：撇圓形有核上皮細(xì)胞占絕大多數(shù)，白細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖a)。動情期：角化上皮細(xì)胞占多大多數(shù)，由散在增至集白細(xì)胞和有核上皮細(xì)胞很少(圖b)。動情后期：片狀角化上皮細(xì)胞，有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞3種都有，無太大差異(圖c)。動情間期：白細(xì)胞占絕大多數(shù)，有核上皮細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖d)。表6⑤病理結(jié)果：如圖7所示

1、動物模型名稱：高脂飼料致高脂血癥大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：180~220g1、實驗方法：大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)20天。分別于造模前和造模20天 ，測定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：造模20天后模型組大鼠血清TC、TG、HDLC、LDLC均增加，與對照組比較具統(tǒng)計學(xué)差異。1.提供動物模型構(gòu)建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動物或相關(guān)組織材料.動物模型作為人類疾病的縮影。

pirb-cki)pirb基因敲入的小鼠，pirb基因敲入到特異性組織或細(xì)胞中。其中pirb-cwt小鼠表達(dá)cre，但不含有l(wèi)oxp-pirb等位基因，pirb-chetandpirb-cki小鼠表達(dá)cre并分別含有一個或者兩個loxp-pirb等位基因。其中f3代雜交小鼠純合子/雜合子鑒定所用的pcr引物如下：f3:5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’r3:5’-atactccgaggcggatcacaa-3’f5:5’-gcatctgacttctggctaataaag-3’homozygotes:644bpheterozygotes:644bp/453bpwildtypeallele:453bp組織特異性的基因敲入也可以通過加入另一對引物，用pcr來驗證：pcrforconstitutivekiallele:f6:5’-ggcaacgtgctggttattgtg-3’r6:5’-ggctgtactctgaggataggcttag-3’f7:5’-agatctgcaagctaattcctgc-3’withcki:1180bp/215bpconstitutivekiallele:303bp注意：如果dna的樣本不夠純，或者pcr的延伸時間不夠長，可能擴(kuò)增不出來1180bp的產(chǎn)物。cre陽性pcr鑒定所需的引物如下:forward:5’-gaacgcactgatttcgacca-3’reverse:5’-gctaaccagcgttttcgttc-3’creamplicon:204bp。序列表西安醫(yī)學(xué)院pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構(gòu)建方法(artificialsequence)1ggcaggcttaaaggctaacctgg23223dna人工序列。小鼠疾病模型研究也是人相關(guān)疾病藥物研發(fā)的起點。非酒肝疾病動物模型建模說明書

明確研究疾病的獨特資源確定小鼠疾病模型的初步選擇。黃浦區(qū)疾病動物模型建模原理

通過pirb敲入動物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細(xì)胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗證pirb基因敲入效果的測序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的結(jié)果圖。黃浦區(qū)疾病動物模型建模原理

上海東寰生物科技有限公司總部位于上海市嘉定區(qū)興賢路1180號5幢2樓206室，是一家經(jīng)營范圍為：從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù)?；ぎa(chǎn)品（除危險化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、民用物品、易制毒化學(xué)品）的銷售?！疽婪毥?jīng)批準(zhǔn)的項目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】。的公司。上海東寰生物作為經(jīng)營范圍為：從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù)?；ぎa(chǎn)品（除危險化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、民用物品、易制毒化學(xué)品）的銷售?！疽婪毥?jīng)批準(zhǔn)的項目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】。的企業(yè)之一，為客戶提供良好的原代細(xì)胞，細(xì)胞增殖與凋亡，細(xì)胞檢測試劑盒，動物疾病模型。上海東寰生物繼續(xù)堅定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路，既要實現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長，又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域，實現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。上海東寰生物始終關(guān)注自身，在風(fēng)云變化的時代，對自身的建設(shè)毫不懈怠，高度的專注與執(zhí)著使上海東寰生物在行業(yè)的從容而自信。