該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及下游的調(diào)節(jié)機(jī)制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動物模型的構(gòu)建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術(shù)方案是:pirb基因敲入的小鼠動物模型,包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點(diǎn)grna1和grna2,將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi),所述grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術(shù)方案為:pirb基因敲入的小鼠動物模型的構(gòu)建方法,具體按照以下步驟實(shí)施:步驟1、基于crispr/cas9技術(shù)構(gòu)建針對c57bl/6j小鼠rosa26基因的特異性grna1和grna2,grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如;步驟2、構(gòu)建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶載體,將打靶載體進(jìn)行線性化處理;步驟3、步驟2中將含有l(wèi)oxp位點(diǎn)打靶載體、步驟1中有活性的grna1和grna2與cas9蛋白共同注射進(jìn)入**小鼠受精卵中,獲得f0代小鼠;步驟4、將步驟3中性成熟的陽性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代,獲得f1代雜合子小鼠,通過pcr、測序和southern雜交確定動物基因型;步驟5、將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。模型應(yīng)適用于多數(shù)研究者使用,容易復(fù)制,實(shí)驗(yàn)中便于操作和采集各種標(biāo)本。閔行區(qū)視覺疾病動物模型建模
步驟i.將步驟h的吸附柱放入收集管,12000rpm離心2min。步驟j.吸附柱放到一個(gè)新的,在吸附柱膜**加入50~200μl滅菌水或者洗脫液,停留5min。(將無菌水或者洗脫液加熱到65℃能夠增加洗脫的得率)。步驟i.基因組dna定量,洗脫的基因組dna可以通過電泳鑒定。方法2:一種低成本基因組dna的粗提方法:步驟a.每只小鼠剪下一段尾巴(2-5mm),放入離心管中,加入100μl尾部消化緩沖液,注意不要剪尾太長;步驟b.將離心管及其內(nèi)容物于56℃孵育過夜;步驟c.過夜后將離心管于98℃孵育13min,使蛋白酶k失活;步驟d.在微型離心機(jī)以**大轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)15min,上清直接用于pcr體系(每50μlpcr體系加入上清2μl)。尾消化緩沖液成分:50mmkcl10mmtris-hcl()%tritonx-100(b)長鏈pcr反應(yīng):長鏈引物:pcrprimers1(℃):擴(kuò)增片段:5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):擴(kuò)增片段:3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’pirb基因敲除型有上述兩條擴(kuò)增片段,野生型等位基因沒有擴(kuò)增產(chǎn)物。淮安Balbc裸鼠疾病動物模型建模動物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面!
圖2是從側(cè)面展示的壓迫元件插入椎間孔的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3是術(shù)后大鼠四肢表現(xiàn)情況。圖4是術(shù)后28天大鼠的雙下肢縮足閾值變化曲線圖。圖5是重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對大鼠背根神經(jīng)壓迫模型的影響。具體實(shí)施方式以下通過具體的實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的描述。以下的實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明,而不是限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1、模型的制備1、腹腔注射1%戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠(220-250g),背部剃毛,碘伏消毒背部皮膚,俯臥位固定于動物手術(shù)臺上,鋪無菌巾。2、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)作一2-3cm縱行切口,切開皮膚,鈍性分離椎旁肌至橫突上方,暴露腰4椎間孔,腰5椎間孔(椎旁肌可用自制拉鉤保持分離狀態(tài))。3、將2根***端11為4mm,第二端12為2mm,直徑為,第二端12置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。如圖1和2所示,可以看到腰4錐體1、腰5錐體2、腰6錐體3、l型棒10、腰4神經(jīng)根4和腰5神經(jīng)根5的位置關(guān)系。當(dāng)l型棒10的***端11插入腰4錐體1的腰4椎間孔后,會對腰4神經(jīng)根4起到壓迫作用;同樣的,當(dāng)l型棒10的***端11插入腰5錐體2的腰5椎間孔后,會對腰5神經(jīng)根5起到壓迫作用。從而達(dá)到模擬腰椎間盤突出壓迫神經(jīng)根的目的,制備得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。
PMID:15082495、7561688)①HE染色②關(guān)節(jié)側(cè)視圖③PCR鑒定、二、糖尿病相關(guān)動物模型1.糖尿病***1)模型構(gòu)建(PMID:30826357)使用鏈佐星(STZ)注射ApoE-/-小鼠,建立糖尿病ApoE-/-小鼠模型,同時(shí)與ApoE-/-小鼠采用高脂喂養(yǎng)18周2)模型檢測指標(biāo)(PMID:29107826、28345659)3)生化指標(biāo)檢測4)超聲檢測5)主動脈染色檢測2.糖尿病心肌病1)誘發(fā)性DCM模型模型構(gòu)建(PMID:29732743)實(shí)驗(yàn)動物:大鼠方法:各大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素150mg·kg-1(STZ用mol·L-1,pH,現(xiàn)配現(xiàn)用),并給予高脂飼料進(jìn)行喂養(yǎng)。①模型檢測指標(biāo)血糖檢測②HE染色③超聲心電圖2)自發(fā)性1型DCM模型3)自發(fā)性2型DCM模型3.糖尿病視網(wǎng)膜病變1)模型構(gòu)建PMID:30862093實(shí)驗(yàn)動物:小鼠方法:糖尿病雄性db/db(+/+Leprdb/J)小鼠。喂養(yǎng)至21周2)模型檢測指標(biāo)①膠質(zhì)原纖維酸性蛋白染色②TUNEL和HE染色DR組視網(wǎng)膜組織內(nèi)核層及外核層結(jié)構(gòu)松散,細(xì)胞排列紊亂GCL,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層;INL,內(nèi)核層;ONL,外核層三、動物模型構(gòu)建總結(jié)1.臨床資料合理性在納入臨床資料時(shí),需關(guān)注特定疾病患者的流行病學(xué)趨勢,即疾病易發(fā)年齡,男女比例等,同時(shí)需考慮是否與體重、基因表達(dá)等具有相關(guān)性。2.模型合理性選擇合適,簡便。找疾病動物模型建模,就找上海東寰。
葡聚糖硫酸鈉(DSS)致潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型:1、動物模型名稱:葡聚糖硫酸鈉(DSS)致潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動物種屬:BALB/c小鼠3、實(shí)驗(yàn)動物性別:雄性4、實(shí)驗(yàn)動物年齡:成年鼠5、實(shí)驗(yàn)動物體重:18g-22g6、實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境:SPF級1、實(shí)驗(yàn)方法:實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水24h,24小時(shí)后提起鼠尾將其懸空,使掙扎以排出大腸遠(yuǎn)端的大便。小鼠自由飲用5%葡聚糖硫酸鈉(DSS)溶液,連續(xù)14天。進(jìn)行疾病活動指數(shù)(DAI)的評估、取結(jié)腸進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。2、檢測標(biāo)準(zhǔn):DAI評分明顯升高,與對照組比較具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)腸病理鏡檢可見結(jié)腸炎癥、病變深度、隱窩破壞、潰瘍病變.能夠準(zhǔn)確模擬人相關(guān)特定功能與疾病特征。淮安纖維化疾病動物模型建模
可以嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)材料的可比性。閔行區(qū)視覺疾病動物模型建模
本能發(fā)明的另一目的是公開了如上所述的方法制備的鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的用途是將該模型用于腰椎間盤突出***方法研究和/或影像學(xué)檢測研究。進(jìn)一步地,該模型用于與磁性相關(guān)的***和/或檢測方面的研究,比如經(jīng)顱磁刺激和核磁共振。本發(fā)明利用壓迫元件插入腰椎椎間孔,模擬腰椎間盤突出后突出物對神經(jīng)根的持續(xù)慢性的機(jī)械壓迫癥狀,有益效果有:1.應(yīng)用機(jī)械壓迫神經(jīng)根模擬腰椎間盤突出病理,癥狀的病因?qū)W與臨床情況接近;2.相關(guān)的疼痛行為類似于特定的慢性疼痛癥狀,且易于客觀測量;3.制備方法簡單,對動物損傷小,穩(wěn)定性好,成功率高;4.造模關(guān)鍵材料壓迫元件不受磁場干擾,無在磁場作用下移位風(fēng)險(xiǎn),有利于后續(xù)對動物進(jìn)行磁療,經(jīng)顱磁刺激等***及核磁共振等檢查;5.造模關(guān)鍵材料壓迫元件不影響磁場,不會對***儀器和核磁共振等儀器產(chǎn)生不良影響;6.此方法獲得的模型由于采用了h62黃銅或聚乳酸材料制備的壓迫元件,使得研究方法與檢測方法不受磁場作用限制,豐富了腰椎間盤突出臨床前研究的***方法及影像學(xué)檢測,為臨床研究提供理論依據(jù)。以下將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步說明,以充分說明本發(fā)明的目的、技術(shù)特征和技術(shù)效果。附圖說明圖1是壓迫元件插入椎間孔的結(jié)構(gòu)示意圖閔行區(qū)視覺疾病動物模型建模