pirb-cki)pirb基因敲入的小鼠，pirb基因敲入到特異性組織或細(xì)胞中。其中pirb-cwt小鼠表達(dá)cre，但不含有l(wèi)oxp-pirb等位基因，pirb-chetandpirb-cki小鼠表達(dá)cre并分別含有一個(gè)或者兩個(gè)loxp-pirb等位基因。其中f3代雜交小鼠純合子/雜合子鑒定所用的pcr引物如下：f3:5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’r3:5’-atactccgaggcggatcacaa-3’f5:5’-gcatctgacttctggctaataaag-3’homozygotes:644bpheterozygotes:644bp/453bpwildtypeallele:453bp組織特異性的基因敲入也可以通過加入另一對(duì)引物，用pcr來驗(yàn)證：pcrforconstitutivekiallele:f6:5’-ggcaacgtgctggttattgtg-3’r6:5’-ggctgtactctgaggataggcttag-3’f7:5’-agatctgcaagctaattcctgc-3’withcki:1180bp/215bpconstitutivekiallele:303bp注意：如果dna的樣本不夠純，或者pcr的延伸時(shí)間不夠長(zhǎng)，可能擴(kuò)增不出來1180bp的產(chǎn)物。cre陽性pcr鑒定所需的引物如下:forward:5’-gaacgcactgatttcgacca-3’reverse:5’-gctaaccagcgttttcgttc-3’creamplicon:204bp。序列表西安醫(yī)學(xué)院pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法(artificialsequence)1ggcaggcttaaaggctaacctgg23223dna人工序列。必須真正了解研究者感興趣且需要的小鼠疾病模型。上海泌尿疾病動(dòng)物模型建模

該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及下游的調(diào)節(jié)機(jī)制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術(shù)方案是：pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型，包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點(diǎn)grna1和grna2，將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi)，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術(shù)方案為：pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，將步驟3中性成熟的陽性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代，獲得f1代雜合子小鼠，通過pcr、測(cè)序和southern雜交確定動(dòng)物基因型；將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。上海品牌疾病動(dòng)物模型建?？筛鶕?jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。

配制成6mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實(shí)驗(yàn)建立大鼠卵巢早衰模型1.實(shí)驗(yàn)儀器及材料：如表1所示。表12.實(shí)驗(yàn)方法：①動(dòng)物信息：sd大鼠，雌性，6-8周，體重180-220g。普通環(huán)境飼養(yǎng)，滅菌飼料飼養(yǎng)，自由飲水。②分組及給藥劑量：如表2所示。表2③給藥途徑及頻率：腹腔注射；2mg、3mg組連續(xù)注射7天；4mg、6mg組***天、第八天注射；對(duì)照組連續(xù)7天注射生理鹽水。④病理檢測(cè)：末次注射后15天，動(dòng)物麻醉，采集血液，分離血清，elisa法測(cè)定血清中e2、fsh、lh水平變化情況。解剖動(dòng)物，取卵巢組織稱重，對(duì)大鼠的卵巢組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察。注射期間每天稱重，給藥后每周稱重兩次，每天進(jìn)行陰道涂片檢測(cè)動(dòng)情周期。3.統(tǒng)計(jì)方法：采用graphpad進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有計(jì)量資料均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示采用單因素方差分析各組間均值的差異，p＜。4.試驗(yàn)結(jié)果：(3mg組注射完成后*存活一只，不進(jìn)行統(tǒng)計(jì))如表3、表4、圖1、圖2、圖3所示：①***水平：與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組e2水平均降低，但是只有2mg組有明顯降低(p＜)，如圖1所示；與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組fsh水平均上升，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖2所示；與空白組相比。

1、動(dòng)物模型名稱：高脂飼料致高脂血癥大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雄性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：成年5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：180~220g1、實(shí)驗(yàn)方法：大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)20天。分別于造模前和造模20天 ，測(cè)定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：造模20天后模型組大鼠血清TC、TG、HDLC、LDLC均增加，與對(duì)照組比較具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料.疾病動(dòng)物模型建模實(shí)驗(yàn)室。

1、動(dòng)物模型名稱：卵清蛋白聯(lián)合氫氧化鋁致支氣管豚鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：豚鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：7~8周齡5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：250~350g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境：SPF級(jí)。1、實(shí)驗(yàn)方法：卵清蛋白聯(lián)合氫氧化鋁誘導(dǎo)。每只豚鼠腹腔注射100μg卵清蛋白（OVA）+30mg氫氧化鋁（Al(OH)3）致敏。次致敏后第5天再致敏1次，共2次。一次致敏后第21d開始采用超聲霧化器噴霧10μgOVA/只，豚鼠置于一直徑約50cm的有蓋大圓盆中，給藥過程中對(duì)盆內(nèi)通O2。便于研究者按實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰S時(shí)采取各種樣品。泰州疾病動(dòng)物模型建模公司

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實(shí)驗(yàn)期間每天進(jìn)行陰道涂片，觀測(cè)動(dòng)情周期變化。進(jìn)一步地，檢測(cè)***水平是指：檢測(cè)雌***(e2)、促卵泡生長(zhǎng)素(fsh)和促黃體生成素(lh)的水平。進(jìn)一步地，檢測(cè)對(duì)比卵巢重量是指：比較各組大鼠雙側(cè)卵巢臟器系數(shù)。進(jìn)一步地，陰道涂片是指：采用陰道脫落細(xì)胞涂片法，使用染色劑為亞甲基藍(lán)。本發(fā)明利用順鉑成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，為基礎(chǔ)研究建立穩(wěn)定的卵巢早衰動(dòng)物模型奠定了良好的基礎(chǔ)。本發(fā)明使用的各種術(shù)語和短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義。提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。附圖說明圖1：e2水平檢測(cè)結(jié)果示意圖。圖2：fsh水平檢測(cè)結(jié)果示意圖。圖3：lh水平檢測(cè)結(jié)果示意圖。圖4：大鼠體重檢測(cè)結(jié)果示意圖。圖5：大鼠卵巢重量統(tǒng)計(jì)示意圖。圖6：動(dòng)情周期檢測(cè)(光鏡下10倍)示意圖，其中，a、b、c、d依次為：動(dòng)情前期，動(dòng)情期，動(dòng)情后期，動(dòng)情間期。圖7：he染色觀察不同方法造模對(duì)卵泡形態(tài)的影響(光鏡下10倍)示意圖，其中，a、b、c、d依次為：空白組，2mg組，4mg組，6mg組。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下上海泌尿疾病動(dòng)物模型建模